Слайд 1ФИЗИОЛОГИЯ ПРОКАРИОТ
Лекция № 2
Слайд 2ОБМЕН ВЕЩЕСТВ И ЭНЕРГИИ У ПРОКАРИОТ
Слайд 3ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЗМА МИКРООРГАНИЗМОВ
Бактерии
Вирусы
любые источники
высокая скорость
метаболизма
адаптации
Н Е Т
Слайд 4Классификация бактерий по источнику углерода
Автотрофы
Гетеротрофы
сапрофиты
паразиты
факультативные
облигатные
риккетсии и хламидии
Слайд 5Пути проникновения питательных веществ в бактериальную клетку
диффузия
активный
транспорт
транслокация
химических
групп
простая
об-легчен-ная
пермеазы
Слайд 6Классификация бактерий
по потребностям в факторах роста
прототрофы
ауксотрофы
азотистые основания,
аминокислоты,
витамины,
липиды
Слайд 7Классификация бактерий
по особенностям энергетического метаболизма
фототрофы
хемотрофы
донор
акцептор
лито-
органо-
окисление
ферментация
аэробное
анаэробное
Слайд 8Классификация бактерий
по отношению к кислороду воздуха
Слайд 11Особенности метаболизма риккетсий, хламидий, микоплазм
Риккетсии
Хламидии
Микоплазмы
Слайд 12Классификация бактериальных ферментов
экзо-
эндо-
конститутивные
индуцибельные
вирулентности
Слайд 13РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ И ПРИНЦИПЫ ИХ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
Слайд 14Способы размножения бактерий
Бинарное деление
Почкование
Фрагментация нитевидных форм
Экзоспоры
Особый цикл
Слайд 19Классификация искусственных
питательных сред
По консистенции
Жидкие
Полужидкие (0,5% агара)
Плотные (1,5-2% агара, свернутые)
Слайд 20Классификация искусственных
питательных сред
По составу
Натуральные
простые
мясо-пептонный агар и бульон (МПА и МПБ)
желатин
молоко
кусочки
овощей
сложные
простые + добавка
Синтетические
Слайд 21Классификация искусственных
питательных сред
По назначению
Основные
Универсальные (простые натуральные)
Специальные (сложные натуральные)
Элективные (селективные)
Дифференциально-диагностические
Консервирующие
Слайд 22
Агар – полисахарид, добываемый из морских водорослей определенных видов; используется для
уплотнения питательных сред в бактериологии по такому же алгоритму, как в быту крахмал или желатин
Свернутые питательные среды – это плотные среды, содержащие сыворотку крови или обогащенные белком (яичные, например), которые уплотняются при прогревании в процессе стерилизации
Натуральные среды готовятся на основе отваров, экстрактов мяса, рыбы, овощей и др. натуральных продуктов
Простые натуральные среды представляют собой такие отвары или экстракты
Сложные натуральные среды получают путем добавления в простые натуральные среды любого вещества (красителя, сахара, антибиотика, крови и т.д.)
Слайд 23
Синтетические питательные среды получают, смешивая чистые химические вещества (как правило, соли)
Элективные
(селективные, избирательные, обогащения) питательные среды – это среды, содержащие вещества, используемые бактериями определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других бактерий
Дифференциально-диагностические питательные среды – это среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным свойствам
Консервирующие питательные среды – это среды, используемые, например, при доставке патологического материала в бактериологическую лабораторию – так как метаболическая активность на них бактерий сводится практически к нулю, то бактерии сохраняются, но не размножаются
Слайд 25Требования к условиям культивирования бактерий
Питательные потребности
простые – растут на универсальных питательных
средах
сложные – растут на специальных питательных средах
Температура культивирования
≈ 37°С – мезофилы
6 – 20°С – психрофилы
50 – 60°С – термофилы
Слайд 26Требования к условиям культивирования бактерий
Реакция среды (рН)
кислая – ацидофилы
нейтральная –
большинство патогенных бактерий
щелочная – алкалифилы
Условия аэрации
не принимают во внимание – факультативные анаэробы
↓ О2 – микроаэрофилы
↑ СО2 – капнофилы
без доступа воздуха – анаэробы
с обязательным доступом воздуха – облигатные аэробы
Слайд 27Характер роста бактерий на искусственных питательных средах
Жидкие питательный среды
диффузная муть –
большинство бактерий
плёнка – «коховские бактерии»
придонный или пристеночный рост – стрептококки
плёнка со спускающимися вниз «сталактитами» – Yersinia pestis
Слайд 28Характер роста бактерий на искусственных питательных средах
Плотные питательные среды
S-форма колоний («гладкая»)
кокки
Г–
палочки, кроме Yersinia pestis
R-форма колоний («шероховатая»)
Г+ палочки
Yersinia pestis
Слайд 30Стадии роста периодической бактериальной культуры
Лаг-фаза
Деления клеток не происходит
Слайд 31Стадии роста периодической бактериальной культуры
Положительного ускорения
Скорость деления клеток увеличивается
Слайд 32Стадии роста периодической бактериальной культуры
Логарифмического роста (экспоненциальная)
Скорость деления клеток максимальная
Слайд 33Стадии роста периодической бактериальной культуры
Отрицательного ускорения
Скорость деления клеток снижается
Слайд 34Стадии роста периодической бактериальной культуры
Стационарная фаза максимума
Количество живых клеток постоянно
Слайд 35Стадии роста периодической бактериальной культуры
Ускоренной гибели
Количество живых клеток начинает снижаться
(убывает с увеличивающейся скоростью)
Слайд 36Стадии роста периодической бактериальной культуры
Логарифмической гибели
Количество живых клеток убывает с
максимальной скоростью
Слайд 37Стадии роста периодической бактериальной культуры
Уменьшения скорости гибели
Количество живых клеток убывает
с уменьшающейся скоростью
Слайд 38Стадии роста периодической бактериальной культуры
Стационарная фаза минимума
Количество живых клеток минимально
Слайд 39Методы создания анаэробных условий для культивирования бактерий
Слайд 40Физические
культивирование в анаэростате (выкачивается воздух) или аппарате Киппа (замещается инертным газом,
например азотом)
трубки Виньяль-Вийона (смешивание с расплавленной и охлаждённой питательной средой с её последующим застыванием – глубинное культивирование)
засев уколом в высокий столбик (полужидкой среды)
культивирование под слоем масла
регенерация жидкой питательной среды перед засевом (кипячение с последующим быстрым охлаждением)
метод Перетца (в чашку Петри заливается охлаждённая среда, смешанная с культурой, на поверхность – предметное стекло, сняв которое можно легко добраться до выросшей культуры)
Слайд 41Химические
в замкнутом объёме протекает химическая реакция с поглощением кислорода
метод Аристовского (сыпучие
ингредиенты)
метод Омелянского (жидкие ингредиенты)
включение в питательную среду редуцирующих веществ (связывают растворённый в среде кислород)
глюкоза
тиогликолевая кислота и др.
Слайд 42Биологические
метод Фортнера (в замкнутом объёме культивируются анаэробы и жадный аэроб –
после прекращения роста которого в безкислородной среде начинают расти анаэробы)
Слайд 43Метод Китта-Тароцци
среда Китта-Тароцци
МПБ с глюкозой
на поверхности – масло
на дне – кусочки
печени
Слайд 44КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
Слайд 45Принципиальная схема культурального метода исследования: предварительный этап
Выделение спороносных бактерий
аэробы и
факультативные анаэробы
отсутствует
анаэробы (строгие и аэротолерантные)
микроскопия мазка из ПМ
засев ПМ на среду Китта-Тароцци
прогретого при 80°С 15 минут
нативного
Слайд 46I этап
Получение изолированного роста (чистой культуры)
аэробы и факультативные анаэробы
микроскопия мазка из
ПМ
засев ПМ на пластинчатый агар петлей (штрихом) или шпателем (по Дригальскому) для получения изолированного роста
анаэробы (строгие и аэротолерантные)
микроскопия мазка из смешанной культуры
засев для получения изолированного роста (по Цейсслеру или по Вейнбергу)
Слайд 48II этап
Накопление чистой культуры
аэробы и факультативные анаэробы
изучение колоний (см. практикум Павловича)
микроскопия
мазка из колонии
РА на стекле с поливалентными сыворотками (ориентировочная РА)
засев колонии на скошенный МПА
анаэробы (строгие и аэротолерантные)
изучение колоний
микроскопия мазка из колонии
засев колонии на среду Китта-Тароцци
Слайд 49III этап
Окончательная идентификация чистой культуры
аэробы и факультативные анаэробы
микроскопия мазка из чистой
культуры
РА на стекле с моновалентными сыворотками (серологическая идентификация вида и серовара)
изучение биохимических свойств
изучение вирулентности
определение эпидемиологических маркеров
анаэробы (строгие и аэротолерантные)
микроскопия мазка из чистой культуры
изучение биохимических свойств
выявление и идентификация экзотоксина
Слайд 50Культуральные признаки бактерий
питательные потребности
оптимальная питательная среда
температура культивирования
условия аэрации
скорость роста
характер роста
на жидких и плотных питательных средах
Слайд 51Изучение биохимических свойств бактерий
(на примере энтеробактерий):
I этап
Питательные среды, методы
Дифференциально-диагностические среды:
Эндо
Левина
Плоскирева
Принцип действия
утилизация содержащейся в среде лактозы
⇓
сдвиг рН в кислую сторону
⇓
изменение цвета колонии
Слайд 52II этап
Питательные среды, методы
Среды накопления и первичной дифференциации:
Рессела (глюкоза+лактоза)
Клиглера (глюкоза+лактоза+Н2S)
Олькеницкого
(глюкоза+лактоза+Н2S+мочевина)
Принцип действия
утилизация глюкозы ⇒ изменение цвета только столбика
утилизация лактозы ⇒ изменение цвета и столбика и косяка
выработка Н2S ⇒ почернение
утилизация мочевины ⇒ покраснение
Слайд 54III этап: изучение сахаролитических свойств
Питательные среды, методы
Среды Гисса (в
коротком ряду Гисса – с лактозой, глюкозой, маннитом, мальтозой, сахарозой)
Принцип действия
утилизация содержащегося в среде углевода
⇓
сдвиг рН в кислую сторону
⇓
изменение цвета среды
Слайд 55III этап: изучение протеолитических свойств
Питательные среды, методы
желатин
продукция индола
продукция аммиака
продукция
Н2S
Внешний эффект при положительной пробе
разжижение
покраснение индикаторной бумажки
посинение лакмусовой бумажки
см. среды Клиглера и Олькеницкого
Слайд 57III этап: определение наличия отдельных ферментов
Питательные среды, методы
каталазная активность
оксидазная активность
Внешний эффект при положительной пробе
газообразование при смешивании культуры с перекисью водорода
покраснение индикаторной бумажки