БИОМИМЕТИЧЕСКИЕ МОДЕЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ И ИХ ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ презентация

Содержание

13.02.2012 IMC RAS БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЧИПЫ: ДЕТЕКТИРОВАНИЕ МИКРО- И НАНОКОЛИЧЕСТВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ В СЛОЖНЫХ СМЕСЯХ КОНСТРУИРОВАНИЕ ПОЛИМЕРНЫХ НОСИТЕЛЕЙ, УПРАВЛЯЮЩИХ ПОВЕДЕНИЕМ КЛЕТОК (ИНЖЕНЕРИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ) АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ: ПРОСТЕЙШАЯ МОДЕЛЬ БИОРАСПОЗНАЮЩИХ

Слайд 1БИОМИМЕТИЧЕСКИЕ МОДЕЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ И ИХ ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
ИВС РАН
Т.Б. ТЕННИКОВА
ИНСТИТУТ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
РОССИЙСКОЙ

АКАДЕМИИ НАУК

13.02.2012

1

Слайд 213.02.2012
IMC RAS



БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЧИПЫ: ДЕТЕКТИРОВАНИЕ МИКРО- И НАНОКОЛИЧЕСТВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ В СЛОЖНЫХ

СМЕСЯХ

КОНСТРУИРОВАНИЕ ПОЛИМЕРНЫХ НОСИТЕЛЕЙ, УПРАВЛЯЮЩИХ ПОВЕДЕНИЕМ КЛЕТОК (ИНЖЕНЕРИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ)

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ: ПРОСТЕЙШАЯ МОДЕЛЬ БИОРАСПОЗНАЮЩИХ СИСТЕМ

ПОЛИМЕРНЫЕ СИСТЕМЫ
БИОЛОГИЧЕСКОГО РАСПОЗНАВАНИЯ

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ: ОТ МОДЕЛЕЙ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЧАСТИЦ К РЕАЛЬНЫМ ВИРУСАМ







Слайд 313.02.2012
ИВС РАН
АФФИННЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ
ТВЕРДОФАЗНЫЕ АДСОРБЦИОННЫЕ ПРОЦЕССЫ










k1
k2











Слайд 413.02.2012
ИВС РАН
ТВЕРДОФАЗНЫЕ АФФИННЫЕ ПРОЦЕССЫ:
ТРЕБУЕМАЯ МОРФОЛОГИЯ СОРБЕНТА: ОБЪЕМ ПОР / ПЛОЩАДЬ

ПОВЕРХНОСТИ ПОР

ДОСТУПНОСТЬ ВНУТРИПОРОВОЙ ПОВЕРХНОСТИ

АДСОРБЦИОННАЯ ЕМКОСТЬ

ОПЕРАТИВНОЕ ВРЕМЯ

Слайд 513.02.2012
ИВС РАН







ОТ ГЕЛЕЙ К МАКРОПОРИСТЫМ МОНОЛИТАМ:
ГЕЛИ
ТВЕРДЫЕ МАКРОПОРИСТЫЕ СОРБЕНТЫ
ТВЕРДЫЕ МАКРОПОРИСТЫЕ МОНОЛИТЫ






Слайд 613.02.2012
ИВС РАН





ПОРИСТАЯ ЧАСТИЦА
МЕЖЧАСТИЧНЫЙ
ПОТОК
ПОДВИЖНОЙ
ФАЗЫ
ДИФФУЗИОННЫЕ ОГРАНИЧЕНИЯ МАССОПЕРЕНОСА:









Слайд 713.02.2012
ИВС РАН







П
О
Т
О
К
ПРОТОЧНЫЙ КАНАЛ




МАССОПЕРЕНОС В ПРОНИЦАЕМЫХ МОНОЛИТАХ:

Слайд 813.02.2012
ИВС РАН
МЕТАКРИЛАТНЫЕ МОНОЛИТЫ:
ГМА-ЭДМА


МИКРОСВОЙСТВА: МОРФОЛОГИЯ ТОПОГРАФИЯ ГИДРОДИНАМИКА ФУНКЦИОНАЛЬНОСТЬ
МАКРОСВОЙСТВА: ХИМИЧЕСКАЯ ПРОЧНОСТЬ МЕХАНИЧЕСКАЯ

ПРОЧНОСТЬ ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ ЭКОНОМИЧНОСТЬ


ПОЛИМЕРНЫЙ ПРОДУКТ С КОНТРОЛИРУЕМЫМИ СВОЙСТВАМИ

Слайд 913.02.2012
ИВС РАН
CIM® DISKS: НОВЫЙ ДИЗАЙН КОЛОНКИ

Слайд 1013.02.2012
ИВС РАН
АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ: ЭТО ХРОМАТОГРАФИЯ?
МЕХАНИЗМ ВЭТТ
СИЛЬНАЯ АДСОРБЦИЯ




























































ДЕСОРБЦИЯ

Слайд 1113.02.2012
ONE-STEP РАЗДЕЛЕНИЕ СМЕСИ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
ИВС РАН

Слайд 1213.02.2012
ИВС РАН
СХЕМА ФИБРИНОЛИЗА
ПЛАЗМИНОГЕН

Слайд 1313.02.2012
ИВС РАН
АФФИННЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ
САЙТЫ СВЯЗЫВАНИЯ ТАП
ПЕПТИДЫ, ИМИТИРУЮЩИЕ ФРАГМЕНТ ПЛАЗМИНОГЕНА:

KCPGRVVGGC (557-566)
KCPGRV (557-562)
RVVGGC

(561-566)

ИНГИБИТОР ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА:

GPRP

ПРОИЗВОДНЫЕ ЛИЗИНА:

KKKK
KKKKGPRP

Слайд 1413.02.2012
СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ ПЕПТИДНЫХ ЛИГАНДОВ
ИММОБИЛИЗАЦИЯ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО СИНТЕЗИРОВАННОГО
И ОЧИЩЕННОГО ПЕПТИДА

ИВС РАН

Слайд 1513.02.2012
ИВС РАН
СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ ПЕПТИДНЫХ ЛИГАНДОВ
ПРЯМОЙ ТВЕРДОФАЗНЫЙ СИНТЕЗ ПЕПТИДОВ НА ПОВЕРХНОСТИ
МАКРОПОРИСТЫХ

ДИСКОВ

+


NH2

NH2

NH2











Слайд 1613.02.2012
ИВС РАН
АФИННОЕ СВЯЗЫВАНИЕ ТАП: КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПАРАМЕТРЫ


Слайд 1713.02.2012
ИВС РАН
АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ: ОТ МОДЕЛЕЙ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЧАСТИЦ К РЕАЛЬНЫМ ВИРУСАМ

Слайд 18ИВС РАН
13.02.2012
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ВИРУСОВ
D=20-300 НМ
ФОРМА, БЛИЗКАЯ К СФЕРИЧЕСКОЙ
ВИРУС-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ БЕЛКИ

Слайд 1913.02.2012
ИВС РАН
ПОЛУЧЕНИЕ ВИРУСОПОДОБНЫХ ЧАСТИЦ
ЛАТЕКС
D=80 нм
D=20-300 нм

Слайд 2013.02.2012
ИВС РАН
НАРУЖНАЯ МЕМБРАНА ВИРУСА
ФОСФОЛИПИД

Слайд 2113.02.2012
МОДЕЛЬ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ВИРУС-КЛЕТКА
ЛИГАНДЫ
ПОВЕРХНОСТЬ
ГМА-ЭДМА
ИВС РАН

Слайд 2213.02.2012
ВЛИЯНИЕ МИКРООКРУЖЕНИЯ НА АФФИННОЕ СВЯЗЫВАНИЕ (KDISS)
ИВС РАН

Слайд 2313.02.2012
ВИРУС ГРИППА КАК ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ
Гемагглютинин
Белок М2
Нейраминидаза

D=80-120 нм
ИВС РАН

Слайд 2413.02.2012
ИММОБИЛИЗАЦИЯ СИАЛИЛЛАКТОЗИЛАМИНА:
ИВС РАН

Слайд 2513.02.2012
ВИРУС ГРИППА А VS МОДЕЛЬ
ДИСК-СИТР-СЛА




ИВС РАН

Слайд 2613.02.2012
ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА ГРИППА А:
ЗОНАЛЬНОЕ ЭЛЮИРОВАНИЕ
ФРОНТАЛЬНОЕ ЭЛЮИРОВАНИЕ
ВИРУС ГРИППА А
А/PR/8/34 (H1N1)

ИВС РАН

Слайд 2713.02.2012
ИВС РАН
АФФИННАЯ КОЛОНКА VS БИОЧИП
БИОЧИП


ОЧИСТКА И ВЫДЕЛЕНИЕ
КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ
МОНОЛИТНЫЙ ДИСК
СТЕКЛО
МОНОЛИТНЫЙ СЛОЙ
СКРИННИНГ И ДИАГНОСТИКА
ДЕТЕКТИРОВАНИЕ
КОЛОНКА

Слайд 2813.02.2012
ИВС РАН









ПРИМЕР: ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АНТИГЕН-АНТИТЕЛО

Слайд 2913.02.2012
ПОЛИМЕРНЫЕ ПЛАТФОРМЫ ДЛЯ БИОЧИПОВ

* Значение относится к содержанию активированных сложноэфирных групп;

иммобилизацию проводили в условиях, когда эпоксидные группы не участвовали в реакции
** Значение относится к содержанию нитрильных групп; иммобилизацию проводили в условиях, когда гидроксильные группы не участвовали в реакции

ИВС РАН

Слайд 3013.02.2012
ИВС РАН
СРАВНЕНИЕ МОНОЛИТНЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ АНАЛИЗА БЕЛКОВ

Слайд 3113.02.2012
- ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ МЕТКА
- ДНК
-ИММОБИЛИЗОВАННЫЙ ОЛИГОНУКЛЕОТИД
ДНК- И АПТАМЕР-ЧИПЫ
ИВС РАН

Слайд 3213.02.2012
ИВС РАН
СХЕМА «СЭНДВИЧ» МЕТОДА ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСОВ ГРИППА А И В
иммобилизация МАт

образец










нанесение

конъюгата МАт-ПХ


СХЕМА ПРЯМОГО МЕТОДА ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСОВ ГРИППА А И В

иммобилизация образцов

нанесение конъюгата МАт-ПХ

7 часов


ДИАГНОСТИКА ВИРУСА ГРИППА

Слайд 3313.02.2012
ИВС РАН
МАТЕРИАЛЫ С «УМНОЙ» (БИОМИМЕТИЧЕСКОЙ) ПОВЕРХНОСТЬЮ:
СКАФФОЛДЫ ДЛЯ ИНЖЕНЕРИИ КОСТНОЙ ТКАНИ

Слайд 3413.02.2012
ИВС РАН
ИНЖЕНЕРИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ
СКАФФОЛД: ТРЕХМЕРНАЯ СРЕДА, ПОДДЕРЖИВАЮЩАЯ РАСТУЩУЮ ТКАНЬ

Слайд 3513.02.2012
ИВС РАН

Биосовместимость
Супрапористая структура
Механическая прочность
СКАФФОЛДЫ:
Материал:

керамика

полимер

композит
Биофункциональность



- Внедрение

в материал биологически активных структур для обеспечения естественного клеточного контакта с поверхностью матрикса
- “Умная” биофункциональная поверхность скаффолда обеспечивает повышение биосовместимости


Слайд 3613.02.2012
ИВС РАН
БИОФУНКЦИОНАЛИЗАЦИЯ ПОВЕРХНОСТИ: ВАЖНЫЕ АСПЕКТЫ

СПОСОБЫ ВНЕДРЕНИЯ БИОМОЛЕКУЛ В СТРУКТУРУ ПОВЕРХНОСТИ:
Физическая

адсорбция (как «удержать» лиганды?)
Ковалентная иммобилизация (каким образом придать химическую функциональность материалу без изменения его необходимых свойств?)


КАК МАКСИМАЛЬНО СОХРАНИТЬ БИОЛОГИЧЕСКУЮ БИОМОЛЕКУЛ НА ПОВЕРХНОСТИ?
- Стерическая доступность
- Способность «захвата» лигандов клетками

Слайд 3713.02.2012
ИВС РАН






БИОМАТЕРИАЛ








R
R
R
R
R
R
R
R
R
R

ГИДРОФИЛЬНЫЙ ПОЛИМЕР С РЕАКЦИОННЫМИ
ГРУППАМИ (R)

2. КОВАЛЕНТНОЕ СВЯЗЫВАНИЕ БИОЛИГАНДОВ: СОЗДАНИЕ
МУЛЬТИФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПОЛИМЕРНОГО «ВЕКТОРА»

КОНСТРУИРОВАНИЕ «УМНОЙ»
ПОВЕРХНОСТИ

Слайд 3813.02.2012
ИВС РАН






БИОМАТЕРИАЛ








КОНСТРУИРОВАНИЕ «УМНОЙ»
ПОВЕРХНОСТИ
3. ИММОБИЛИЗАЦИЯ МУЛЬТИФУНКЦИОНАЛЬНОГО
«ВЕКТОРА»

НА ПОВЕРХНОСТИ БИОМАТЕРИАЛА

Слайд 3913.02.2012
ИВС РАН
ВЫБОР ГИДРОФИЛЬНОГО ПОЛИМЕРА:
БИОСОВМЕСТИМОСТЬ
КОНТРОЛИРУЕМАЯ МОЛЕКУЛЯРНАЯ МАССА
(для недеградируемых макромолекул – [10

– 30 kDa])

СПОСОБНОСТЬ К СВЯЗЫВАНИЮ
Ковалентное – Специальные реакционные группы или концевая функциональность
Адсорбция – Специальные блоки или удовлетворительные адсорбционные свойства цепи

КОНТРОЛИРУЕМОЕ КОЛИЧЕСТВО РЕАКЦИОННО-СПОСОБНЫХ ГРУПП





Слайд 4013.02.2012
ИВС РАН
СИНТЕЗ ГИДРОФИЛЬНОГО ПОЛИМЕРА
пМАГ
пМВА

Слайд 4113.02.2012
ИВС РАН
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ЛИГАНДЫ:
НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АДГЕЗИОННЫЕ МОТИВЫ (ПОЛИ-L-ЛИЗИН)
СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ЛИГАНДЫ КЛЕТОЧНОЙ АДГЕЗИИ (RGD-ПЕПТИДЫ)
ФАКТОР РОСТА

И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ КЛЕТОК (BMP-2)




Слайд 4213.02.2012
ИВС РАН
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ЛИГАНДЫ: МОДЕЛЬ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ КЛЕТКА-СКАФФОЛД

Слайд 4313.02.2012
ИВС РАН
STEP-BY-STEP СИНТЕЗ ПОЛИМЕРНОГО ВЕКТОРА

Слайд 4413.02.2012
ИВС РАН
МИНЕРАЛЬНЫЕ ПОДДЕРЖИВАЮЩИЕ СРЕДЫ
SPONCERAM (ZELLWERK GMBH, GERMANY)

Слайд 4513.02.2012
ИВС РАН
ЭКСПЕРИМЕНТЫ В БИОРЕАКТОРЕ
РЕАКТОР ДЛЯ ДИНАМИЧЕСКОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
КЛЕТОК С ОБРАЗОВАНИЕМ

ТКАНЕВОЙ СТРУКТУРЫ

Слайд 46ИВС РАН
13.02.2012
ПЦР АНАЛИЗ БЕЛКОВ – МАРКЕРОВ ОСТЕОГЕНЕЗИСА
ДАННЫЕ, ПРЕДОСТАВЛЕННЫЕ S. ROEKER

& C. CASPER (ITC UH, HANOVER)

Слайд 4713.02.2012
ИВС РАН

ЧИП-АНАЛИЗ ОСТЕОПОНТИНА
ОСТЕОПОНТИН
БИОТИНИЛИРОВАННЫЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ ОСТЕОПОНТИНА
КОНЬЮГАТ СТРЕПТАВИДИНА С ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МЕТКОЙ

CY3






МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ ОСТЕОПОНТИНА

ПРЕДЕЛ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ
ОСТЕОПОНТИНА 0.3 ПМОЛЬ/МЛ

Слайд 4813.02.2012
ИВС РАН
БИОМИМЕТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ:
РЕАЛЬНОСТЬ И ПЕРСПЕКТИВЫ
1. СКОРОСТНЫЕ ВЫСОКОСПЕЦИФИЧНЫЕ РАЗДЕЛЕНИЯ БИОМОЛЕКУЛ И

БИОЧАСТИЦ (БЕЛКИ, ДНК, ВИРУСЫ)

2. ON-LINE КОНТРОЛЬ ПРОИЗВОДСТВА РЕКОМБИНАНТНЫХ ПРОДУКТОВ (FIA ANALYSIS)

4. СИСТЕМЫ АДРЕСНОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

3. ВЫСОКОСКОРОСТНЫЕ ИЛИ НАНОМАСШТАБНЫЕ ФЕРМЕНТНЫЕ РЕАКТОРЫ

Слайд 4913.02.2012
ИВС РАН
БЛАГОДАРНОСТЬ:
ОСТРЯНИНА (ИВАНОВА) НАТАЛЬЯ
ЛОЖКИНА ОЛЬГА
РАХМАТУЛЛИНА ЕКАТЕРИНА
ВЛАХ ЕВГЕНИЯ
РАСПОПОВА ИНДИРА
КАЛАШНИКОВА ИРИНА
КОРЖИКОВ ВИКТОР
СЛАБОСПИЦКАЯ (РОБЕР)

МАРИНА
СИНИЦЫНА ЕКАТЕРИНА
МАКСИМОВА ЕЛЕНА
ПОНОМАРЕВА ЕВГЕНИЯ
ЛИТВИНЧУК ЕВГЕНИЯ
СУХАНОВА ТАТЬЯНА
МАТУСОВА СОФЬЯ
АРСЕВАТКИНА НАТАЛЬЯ
ПИУНОВА ВИКТОРИЯ
СЕРГЕЕВА ЮЛИЯ
ГУСЕВСКАЯ КСЕНИЯ
АВЕРЬЯНОВ ИЛЬЯ
СТЕФАНОВА ЕКАТЕРИНА

Слайд 5013.02.2012
ИВС РАН
ПЛАТОНОВА Г.А.
ХИМИЧ Г.Н.
ВЛАСОВ Г.П.
КОРОЛЬКОВ В.И.
СКВОРЦОВА Н.Н.
МЕРИНГОВА Л.Ф.
ГУПАЛОВА Т.В.
ТОТОЛЯН А.А.
КИСЕЛЕВ О.И.
БАРАНОВ

В.С.
ИВАНОВ А.М.
КРАСИКОВ В.Д.
ШПИГУН О.А.
FREITAG RUTH
KASPER CORNELIA
KRETZMER GERLINDE
SCHEPER THOMAS
GIOVANINNI ROBERTO
BERRUEUX LAURE
TAPPE ALEXANDER
RENEMANN GEORG

БЛАГОДАРНОСТЬ:

Слайд 5113.02.2012
ИВС РАН
БЛАГОДАРНОСТЬ:
BIA SEPARATIONS GMBH (SLOVENIA):

STRANCAR ALES
PODGORNIK ALES
BARUT MILOS
GLOVER DARRYL
PETERKA JANIS
DESMIN NINA
KUZMANIC

JANA

Слайд 5213.02.2012
ИВС РАН
БЛАГОДАРНОСТЬ:
INSITUTE OF MACROMOLECULAR CHEMISTRY, PRAGUE:

SVEC FRANTISEK
BLEHA MIROSLAV
HORAK DANIEL
SOLAROVA HELENA
BENES MILAN
PESKA

JAN
JELINKOVA MIROSLAVA
HRADIL JIRI
LENFELD JIRI
MUTINOVA IVANA
NAHUNEK MICHAL

Слайд 53ИВС РАН
ПУБЛИКАЦИИ
БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ
БИОХИМИЯ
ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
ЖУРНАЛ ПРИКЛАДНОЙ ХИМИИ
ИЗВЕСТИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК
ПРИКЛАДНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ANALYTICAL CHEMISTRY
ANALYTICA

CHIMICA ACTA
ANGEWANTE MAKROMOLECULAR CHEMIE
BIOCONJUGATE CHEMISTRY
JOURNAL OF APPLIED POLYMER SCIENCE
JOURNAL OF BIOCOMPATIBLE POLYMERS
JOURNAL OF BIOMEDICAL MATERIALS RESEARCH
JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B (BIOMEDICAL APPLICATIONS)
JOURNAL OF HIGH RESOLUTION CHROMATOGRAPHY
JOURNAL OF LIQUID CHROMATOGRAPHY
JOURNAL OF PEPTIDE SCIENCE
JOURNAL OF SEPARATION SCIENCE
LETTERS IN PEPTIDE CHEMISTRY
POLYMER
REACTIVE AND FUNCTIONAL POLYMERS
TALANTA

13.02.2012

Слайд 5413.02.2012
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ
ИВС РАН

Похожие презентации

Стоимость ПО 244
История развития интернета 268
Психологические основы дошкольной игры презентация к уроку (старшая группа) 317
Современные перспективные разработки. Космический корабль Федерация 296
Роль и функции муниципалитетов, инициативных групп и населения 214
vesna 237

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.

Для правообладателей

Яндекс.Метрика