Исследование тканеспецифичности энхансерной активности LTR HERV-K Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Лаборатория структуры и функции генов человека. Руководитель: к.б.н., с.н.с. Акопов С.Б. презентация

Содержание

Свойства ретровирусов Вирионы ретровирусов окружены липопротеидной оболочкой. Геном представлен двумя однонитевыми нефрагментированными молекулами РНК. Репликация имеет две уникальные черты: а) с помощью вирус-специфичного фермента обратной транскиптазы осуществляется перевод РНК в

Слайд 1Исследование тканеспецифичности энхансерной
активности LTR HERV-K

Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина

и
Ю.А. Овчинникова РАН
Лаборатория структуры и функции генов человека.
Руководитель: к.б.н., с.н.с. Акопов С.Б.




Слайд 2Свойства ретровирусов
Вирионы ретровирусов окружены липопротеидной оболочкой.
Геном представлен двумя однонитевыми нефрагментированными

молекулами РНК.
Репликация имеет две уникальные черты: а) с помощью вирус-специфичного фермента обратной транскиптазы осуществляется перевод РНК в ДНК форму, б) новосинтезированная ДНК интегрирует в геном инфицированной клетки.




Слайд 3








U3
R
U5



U3
R
U5
gag pol env
8. Транспорт РНК

7. Процессинг РНК

6. Транскрипция
LTR
LTR








Cap
(A)n
Геномная

РНК вируса

Cap

(A)n

Сплайсированная РНК







Белки

9. Трансляция

10.Сборка вируса

3. Освобождение
РНК

4. Обратная
транскрипция

5. Интеграция

Вирус

11. Выход из клетки

Вирус (вирусоподобная частица)




2. Проникновение
в клетку










1. Взаимодействие
с рецептором

Схема жизненного цикла ретровирусов


Слайд 4Структура LTR


Слайд 5Образование одиночных LTR в геноме



U3
R
U5



U3
R
U5
gag

pol env

LTR

LTR

Рекомбинация




Транскрипция

Одиночный LTR


Слайд 6Потенциальная роль HERV в патогенезе
Индукция геномной нестабильности
Активация или инактивация генов, вовлечённых

в регуляцию клеточного цикла
Продуцирование иммуносупреcсивных факторов
Изменение нормальной регуляторной функции HERV

Scand. J. Immunol. 48, 329-338,1998


Слайд 7Задачи
Наработать и проверить векторные конструкции.
Методом транзиентной экспрессии репортерного гена люциферазы измерить

энхансерную активность полноразмерного и частично делетированного LTR в различных линиях клеток.
Статистически обработать полученные результаты.
Оценить тканеспецифичность экспрессии полноразмерного и частично делетированного LTR.
Сравнить активность полноразмерного и частично делетированного LTR в исследованных линиях клеток.

Исследование тканеспецифичности энхансерной активности LTR HERV-K


Слайд 8Расположение LTR L47334 на хромосоме 19 человека
Z
N
F
1
3
4
Z
N
F
Z
N
F

















ACUTE LYMPHOBLASTIC LEUKEMIA
LYMPHOID LEUKEMIA
LEUKEMIA


HEMOLYTIC ANEMIA
MALIGNANT

HYPERTHERMIA

MYOTONIC DYSTROPHY







































































































Pr1

Pr2

33bp

23bp

923bp






Слайд 9


R
Транскрипция
TATAA
AATAGGAGACTCCATTTTG
AATAAA
Участок связывания белков ERF и YY1
Промотор
Сигнал
полиаденилирования
Структура LTR HERV-K
U3
U5

Негативный
регулятор


R
TATAA
AATAGGAGACTCCATTTTG
AATAAA
U3

Полноразмерный LTR


LTR с делецией негативного регулятора


Слайд 10
Схема исследования энхансерной активности LTR HERV-K с использованием системы экспрессии репортерного

гена

или


Клонирование в репортерный вектор,
лишенный энхансера.

Трансфекция ДНК в
клетки млекопитающих

Измерение активности
люциферазы

ПЦР-амплификация LTR























































Слайд 11Использованные плазмиды


Слайд 12Использованные плазмиды


Слайд 13Контрольная плазмида


Слайд 16Результаты
LTR



LTR
Luc
Pr SV 40


Слайд 17Результаты


Слайд 18Результаты
Энхансер SV-40



Энхансер SV-40
Luc
Промотор SV 40


Luc
Промотор SV 40
Промотор SV-40


Слайд 19Выводы
Показано наличие энхансерной активности LTR, принадлежащего семейству HERV-K (HML-2), в клеточной

линии тератокарциномы Tera-1.
Обнаружена зависимость эффективности энхансера от клеточной линии, то есть его тканеспецифичность.
Показано, что активность энхансера SV40 для линий NT2/D1, Tera-1, HeLa, NGP-127, CHO-K1 значительно превышает активность в линиях Jurkat, HL-60, 293.
Показано, что делеция сайленсер-подобного элемента в U5 области LTR HERV-K не влияет на энхансерную активность этого LTR.

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика