Виды рода Haemophilus и вызываемые ими болезни презентация

Афанасьева-Пфейффера) —впервые выделена немецким во время пандемии гриппа как возбудитель инфлюэнцы (гриппа).

входят в состав нормальной микрофлоры организма человека, другие вызывают тяжелые инфекции.
Из организма человека можно выделить 8 видов гемофилов,
два из них - H.influenzae и H.ducrey - основные патогены.

полиморфизм и недостаточное прокрашивание могут существенно затруднять обнаружение гемофильной палочки, поэтому некоторые авторы предлагают наряду с окраской по Граму проводить окраску метиленовым синим. В этом случае микроорганизмы (МО) имеют синий цвет на серо-голубом фоне.

Н. influenzae в спиномозговой жидкости (окраска по Граму)

Н. influenzae чистая культура (окраска по Граму)

роста необходимы ростовые факторы, содержащиеся в эритроцитах (что отражает название Haemophilus – «любящие кровь»), в частности Х-гемин и V- NAD)
Вероятность выделения МО из клинического материала нижних дыхательных путей повышается при использовании питательных сред, содержащих бацитрацин

Оптимальными условиями инкубации H. influenzae являются влажная атмосфера с повышенным содержанием СО2 (5-10%) и температура 35-37 оС.

для капсульных вирулентных штаммов.
Слабовирулентные бескапсульные варианты гемофильной палочки образуют R-колонии - более мелкие (около 1 мм), мелкозернистые, с неровными краями.
Характерной особенностью гемофильных бактерий является «феномен кормушки» или «феномен сателлита»: они могут расти на кровяном агаре вокруг колоний стафилококков или других бактерий, вызывающих гемолиз или продуцирующих НАД.
Гемофильные бактерии гемолитической активностью не обладают.
Для чистой культуры гемофильной палочки характерно наличие специфического мышиного запаха

и орнитиндекарбоксилазную активность выделяют выделяют 9 биотипов (I—VIII и aegyptius)
Биотипирование гемофильной палочки имеет лишь эпидемиологическое значение.

c, d, e, f).
Капсульный антиген наиболее важного в патологии человека серотипа b гемофильной палочки представляет собой полимер рибозы и рибитола - полирибозорибитолфосфат (PRP).
Большинство вариантов H. influenzae, представителей нормальной микрофлоры верхних отделов респираторного тракта, являются бескапсульными формами, которые принято называть нетипируемыми.
Антигенными свойствами обладают также белки наружной мембраны, углеводные части ЛПС и ЛОС

был полностью секвенирован в 1995 г. после Escherichia coli.
Геном представлен кольцевой двуцепочечной молекулой ДНК размером 1830138 п.н. и содержит 1789 гена, из которых 1657 кодируют белки.
Есть доказательства, что H. Influenzae в состоянии перенести как межвидовые преобразования, так и внутривидовые in vivo (в организме хозяина) путем трансформации
Рестрикционные эндонуклеазы от H. Influenzae, например, Hind III, широко используются в биотехнологии, в анализе и клонировании ДНК.

Геном

под воздействием солнечных лучей
при высыхании.
Дезинфицирующие растворы в обычно применяемых на практике концентрациях убивают Н. influenzae через несколько минут.

главный фактор вирулентности
Капсула не только антифагоцитарный фактор. Ее присутствие делает невозможной активацию комплемента, в результате бактерии в крови и цереброспинальной жидкости не встречают сопротивления;
 ЛПС клеточной стенки - эндотоксин; 
бактерицидный эффект сывороточных антител зависит от таких антигенных структур, как липоолигосахарид (ЛОС) и белки наружной мембраны P1 и P2.

является почти универсальным фактором патогенности
Такие аутотранспортеры H. Influenzae, как IgA1 протеаза, Hap, Hia, and Hsf обеспечивают колонизацию слизистых и персистенцию в организме человека.
Адгезия к респираторному эпителию, образование микроколоний с последующим формированием биопленки, протеазная активность, способствующие распространению бактерий и дающие возможность «ускользания» от иммунной защиты, - важные патогенетические механизмы

прикрепление H. Influenzae к эпителиальным клеткам ( как правило, гемофильная палочка прикрепляется к эпителию без ресничек)
(b) после успешной адгезии бактерии Hap–Hap взаимодействие ведет к образованию микроколонии (c) Следом формируется биопленка, устойчивая к действию иммунной системы хозяина
(d) в отсутствии SLPI (ингибитор секреторной лейкоцитарной пептидазы, защищающий эпителиальные клетки от сериновой протеазы) протеолитическая активность Hap позволяет бактериям покидать биоплпенку (e) Hap-опосредованная адгезия способствует проникновению в эпителиальные клетки ( в этой нише бактерии ускользают от механизмов местного иммунитета)

(при распылении капель секрета верхних дыхательных путей при кашле, разговоре, чиханье).
Виды Haemophilus являются частью нормальной флоры дыхательных путей человека и многих видов животных. H. influenzae патогенны только для человека.
В России частота носительства у детей составляет не более 5%, однако в окружении больного доля их может возрастать до 30% и выше.
Нетипируемые формы колонизируют ротоглотку здоровых детей с частотой 35-78% в зависимости от возраста.
Нетипируемые штаммы H. influenzae часто колонизируют нижние дыхательные пути у пациентов, страдающих ХОЗЛ и муковисцидозом
Наиболее часто Hib-инфекции подвержены дети в возрасте 6–48 мес, реже новорожденные и дети старше 5 лет.
Подавляющее число заболевших приходится на возраст от 3 мес до 3 лет, заболевания характеризуются полиморфизмом клинических проявлений

у взрослых
В большинстве случаев это бескапсульные (нетипируемые) штаммы гемофильной палочки, для которых наличие протеина Р2 внешней мембраны является основным фактором вирулентности.
Возбудитель может длительно персистировать в области ворот инфекции в виде латентной бессимптомной формы заболевания.
При наличии сопутствующих вирусных инфекций или увеличении микробной массы инаппарантное носительство Hamophilus influinzae переходит в манифестную форму, распространяясь по слизистой оболочке дыхательных путей и вызывая бронхит.

(дома ребенка, интернаты);
искусственное вскармливание;
иммунодефициты (первичные и вторичные, включая ВИЧ-инфекцию);
хронические заболевания (сердца, легких, сахарный диабет).

, H. influenzae прикрепляется к мерцательному эпителию и колонизирует его.
Затем бактерии проникают в подслизистый слой и с помощью эндотоксина вызывают местные гнойно-воспалительные процессы.
Нетипируемые штаммы приводят к заболеванию, повреждая поверхность клеток респираторного эпителия.
Штаммы, проявляющие повышенную вирулентность, способны мигрировать в лимфо- и кровоток.
Проникая в кровоток, вызывает системную инфекцию и гематогенным путем достигает мозговых оболочек, костей, суставов.

антителами класса IgG
PRP капсульного антигена типа b является Т-независимым антигеном, антитела к которому образуются без участия Т-хелперов.
У младенцев способность синтезировать антитела к таким антигенам снижена, поэтому они не способны синтезировать необходимое количество антител к этому антигену и пик заболеваемости гемофильной инфекцией (в особенности типа b) приходится на возраст от 6 мес до 2 лет, когда концентрация материнских антител заметно снижается.

невакцинированных и непереболевших) имеются естественно приобретенные протективные антитела к капсульному антигену H. influenzae типа b (анти-PRP-антитела).
Тем не менее пневмония и артрит, вызванные H. influenzae, могут развиваться у взрослых даже при наличии таких антител.
Были идентифицированы антитела с бактерицидной активностью против белков наружной мембраны (например, P1, P2) и липоолигосахарида
Ключевая роль в защите от внутриклеточных паразитов принадлежит Т клеткам

вакцины против Hib инфекции.
Моновалентные вакцины различаются между собой в зависимости от белка носителя, метода химической конъюгации и размера полисахаридов, в результате чего имеют различные иммунологические свойства.
Все вакцины против Hib инфекции основаны на бактериальном полисахариде, конъюгированном с белком носителем — дифтерийным анатоксином (PRP-D), либо дифтерийным анатоксинподобным белком (PRP-HbOC), либо столбнячным анатоксином (PRP-T), либо белком наружной мембраны менингококка (PRP-OMP).
Конъюгация полисахарида с белком индуцирует T-зависимый иммунный ответ к Hib полисахариду. В результате даже у детей первых месяцев жизни формируется длительный иммунитет.

цефиксим (99,8%), амоксициллин/клавулановая кислота (98,2%), хлорамфеникол (98,1-99,6%) и фторхинолоны (99,8%)
Наиболее значимой с клинической точки зрения является проблема приобретенной резистентности гемофильной палочки к ампициллину, обусловленная продукцией плазмидных β-лактамаз.
Такие МО обычно чувствительны к ингибиторозащищенным пенициллинам и цефалоспоринам (кроме цефалоспоринов I поколения).
Кроме того, в последние годы описаны штаммы H. influenzae, устойчивость которых к ампициллину связана с изменением мишени действия β-лактамных антибиотиков (пенициллинсвязывающих белков) или снижением проницаемости наружной клеточной стенки.
Эти штаммы получили название β-лактамазонегативных ампициллинрезистентных (БЛНАР) и считаются нечувствительными к ингибиторозащищенным пенициллинам и таким цефалоспоринам, как цефаклор, цефуроксим, цефиксим, цефтибутен

на пневмонию); гнойное отделяемое, пунктаты (средний отит, синусит); СМЖ, кровь (менингит, менигоэнцефалит); кровь (септические состояния); пунктаты (гнойный артрит, остеомиелит); секционный материал; мазок из зева, мазок из носоглотки.
В связи с тем что гемофильная палочка отличается низкой жизнеспособностью во внешней среде, рекомендуется использовать транспортные средства и немедленно (не позднее 2 ч) доставлять материал в клиническую лабораторию
Идентификация выделенной чистой культуры основана на культуральных, биохимических показателях, серотипировании капсульных штаммов (непрямая латекс-агглютинация с антительным диагностикумом)

 Латекс-агглютинация

выполняют при использовании наборов реагентов, основанных на реакции латекс-агглютинации или коагглютинации, встречный иммуноэлектрофорез и иммуноферментный анализ.

Разрабатываются другие экспресс-тесты для обнаружения H. influenzae (как типа b, так и нетипируемых) в клиническом материале (с помощью моноклональных антител, конъюгированных с иммунопероксидазой, радиоактивно меченые ДНК-пробы и др.).
Молекулярно-генетические методы: ПЦР. Исследование основано на обнаружении специфического фрагмента гена bex A, кодирующего связанный с капсулой белок возбудителя и проводится только с материалом, полученным из стерильных локусов (СМЖ, кровь, пунктаты)