Презентация на тему Производство моноклональных антител

Презентация на тему Презентация на тему Производство моноклональных антител, предмет презентации: Медицина. Этот материал содержит 45 слайдов. Красочные слайды и илюстрации помогут Вам заинтересовать свою аудиторию. Для просмотра воспользуйтесь проигрывателем, если материал оказался полезным для Вас - поделитесь им с друзьями с помощью социальных кнопок и добавьте наш сайт презентаций ThePresentation.ru в закладки!

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1
Производство моноклональных антителЛектор: асс., к.б.н.Караева Альбина Маирбековна
Текст слайда:

Производство
моноклональных
антител


Лектор: асс., к.б.н.
Караева Альбина Маирбековна


Слайд 2
ПЛАН ЛЕКЦИИ:Text in here2. Моноклональные антитела (МкАТ). История создания МкАТ.1. Иммуноферментный
Текст слайда:

ПЛАН ЛЕКЦИИ:


Text in here


2. Моноклональные антитела (МкАТ).
История создания МкАТ.


1. Иммуноферментный анализ (ИФА) 

3. Этапы производства МкАТ.


4. Современная номенклатура МкАТ.


Слайд 3
Иммунная система – 	это система органов и клеток, реагирующая на генетически
Текст слайда:


Иммунная система –
это система органов и клеток, реагирующая на генетически чужеродную информацию и участвующая в защите макроорганизма от такой информации.
Состоит из 3 компонентов:
Клеточный;
Молекулярный;
Генетический.


Слайд 4
Иммунопрофилактика – комплекс противоэпидемических мероприятий, направленный на предупреждение инфекционных болезней и осуществляемый путем иммунизации.
Текст слайда:

Иммунопрофилактика –
комплекс противоэпидемических мероприятий, направленный на предупреждение инфекционных болезней и осуществляемый путем иммунизации.


Слайд 5
Иммуноферментный анализ (ИФА) - это лабораторное исследование, основанное на реакции «антиген-антитело». Суть
Текст слайда:

Иммуноферментный анализ (ИФА) - это лабораторное исследование, основанное на реакции «антиген-антитело». Суть этого лабораторного метода - выявление специфических антител с помощью специальных биохимических реакций, которые помогают определить присутствие или отсутствие антител и их количество.
Методом ИФА можно определить уровень гормонов, иммуноглобулинов, иммунологических комплексов и других БАВ


Слайд 6
Материалом для проведения иммуноферментного анализа является кровь, взятая из вены. Помимо
Текст слайда:

Материалом для проведения иммуноферментного анализа является кровь, взятая из вены. Помимо крови для ИФА могут понадобиться околоплодные воды и материал стекловидного тела.


Слайд 7
В качестве «маркеров» применяются1. радиоактивные метки (это радиоиммунный анализ (РИА, с
Текст слайда:

В качестве «маркеров» применяются
1. радиоактивные метки (это радиоиммунный анализ (РИА, с использованием радиоактивных атомов – тритий, радиоактивный иод и другие).
2. ферментные метки (если ферменты стабильны, активны и действуют в минимальных концентрациях). Суть: субстрат превращается в продукт и далее обнаруживается фотометрическим методом.
3. Субстратные метки (АТФ и НАД), которые «пришиваются» к молекуле антигена через адениновый остаток и сохраняют способность взаимодействия с ферментом.
Для введения ферментативной метки применяются химические, биохимические, иммунологические способы.


Слайд 8
Принцип проведения иммуноферментного анализа кровиНепрямой иммуноферментный анализ (indirect ELISA)Метод непрямого иммуноанализа
Текст слайда:

Принцип проведения иммуноферментного анализа крови

Непрямой иммуноферментный анализ (indirect ELISA)
Метод непрямого иммуноанализа характеризуется осуществлением 3-х стадийного процесса, на первой стадии которого антиген адсорбируется на специально подготовленном пластике, на второй с антигеном взаимодействуют специфичные к нему антитела, а на третьей в систему вводят антивидовые антитела, конъюгированные с ферментом, обуславливающим проведение индикаторной ферментативной реакции. В данной методике в качестве фермента используют пероксидазу хрена. Реакция проводится в специальных 96-луночных планшетах.


Слайд 9
Прямой иммуноферментный анализ (direct ELISA)Методика прямого иммуноанализа имеет лишь небольшие отличия
Текст слайда:

Прямой иммуноферментный анализ (direct ELISA)
Методика прямого иммуноанализа имеет лишь небольшие отличия по сравнению с методикой непрямого иммуноанализа. Так, стадии I и II одинаковы в обоих типах анализа. Отличие заключается в том, что в прямом варианте иммуноанализа на стадии III используют специфичные антитела, конъюгированные с ферментной меткой. При необходимости также можно проводить раститровку специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой, аналогично описанному ранее для неконъюгированных антител. Стадия IV опускается, а дальнейшие стадии (V-VII) проводятся аналогично описанному выше для непрямого варианта иммуноанализа.
Иммуноанализ сэндвич-типа (Sandwich-type immunoassay)
В данном варианте иммуноанализа используется пара антител, специфичных к пространственно удаленным эпитопам исследуемого антигена.


Слайд 10
Расшифровка результатов анализаИммуноферментный анализ крови позволяет выявить антитела разных видов. Это
Текст слайда:

Расшифровка результатов анализа

Иммуноферментный анализ крови позволяет выявить антитела разных видов.
Это иммуноглобулины класса А, М, G.


Слайд 11
Преимущества иммуноферментного анализавысокая чувствительность и точность метода;возможность проведения ранней диагностики, поскольку
Текст слайда:

Преимущества иммуноферментного анализа
высокая чувствительность и точность метода;
возможность проведения ранней диагностики, поскольку ИФА позволяет определять классы иммуноглобулинов при анализе;
прослеживание динамики инфекционного процесса;
возможность получения быстрого ответа;
удобство метода.

Недостатки
Основным недостатком иммуноферментного анализа является тот факт, что в редких случаях метод выдает ложноотрицательные или ложноположительные результаты.


Слайд 12
Моноклональные антитела (МкАТ) — это антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к
Текст слайда:

Моноклональные антитела (МкАТ) — это антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы.
МкАТ могут быть выработаны на почти любое вещество (в основном белки МкАТ могут быть выработаны на почти любое вещество (в основном белки и полисахариды), которое антитело будет специфически связывать.
МкАТ широко используются в биохимии МкАТ широко используются в биохимии, молекулярной биологии МкАТ широко используются в биохимии, молекулярной биологии и медицине.


Слайд 13
МкАТ – химически гомогенные по структуре антитела, строго специфичные в отношении
Текст слайда:


МкАТ – химически гомогенные по структуре антитела, строго специфичные в отношении одного эпитопа, синтезируемые клонированными гибридомами – клеточными гибридами, полученными при слиянии нормальных антителообразующих клеток с миеломными опухолевыми клетками, способными к неорганическому росту.


Слайд 14
Эпитоп – фрагмент молекулы антигена, локализующийся внутри или на поверхности молекулы, определяющий его специфичность.
Текст слайда:


Эпитоп – фрагмент молекулы антигена, локализующийся внутри или на поверхности молекулы, определяющий его специфичность.


Слайд 15
Гибридома (клетка гибридная) – гибридная клеточная линия, полученная при слиянии нормальных антителообразующих клеток и миеломных клеток.
Текст слайда:


Гибридома (клетка гибридная) – гибридная клеточная линия, полученная при слиянии нормальных антителообразующих клеток и миеломных клеток.


Слайд 16
В 1895 г. осуществлена первая попытка применения антител для лечения онкологических
Текст слайда:


В 1895 г. осуществлена первая попытка применения антител для лечения онкологических заболеваний.

В 1975 г. лауреты Нобелевской премии Жорж Келер и Сезар Мильштейн впервые предложили процесс получения МкАТ.

В 1988 г. Грег Винтер разработал специальную методику «очеловечивания» моноклональных антител.


Слайд 17
Этапы получения гибридомСелекция миеломных клеток.Иммунизация мышей антигеном.Получение В-лимфоцитов.Гибридизация клеток миеломы и
Текст слайда:

Этапы получения гибридом

Селекция миеломных клеток.
Иммунизация мышей антигеном.
Получение В-лимфоцитов.
Гибридизация клеток миеломы и В-лимфоцитов.
Селекция гибридом на среде ГАТ.
Определение антителообразующей способности гибридом.


Слайд 18
7. Накопление клона гибридом, синтезирующих моноклональные антитела заданной специфичности
Текст слайда:


7. Накопление клона гибридом, синтезирующих моноклональные антитела заданной специфичности (к известному антигену).
8. Крупномасштабное культивирование гибридом и накопление моноклональных антител.
9. Концентрирование, выделение и очистка МкАТ.


Слайд 19

Слайд 20
1. Селекция миеломных клеток	В-лимфоциты и миеломные клетки выделяют из мышей и
Текст слайда:

1. Селекция миеломных клеток

В-лимфоциты и миеломные клетки выделяют из мышей и крыс.
Клетки миеломы (плазмоциты) - это злокачественно трансформированные лимфоидные клетки костного мозга.
Клетки миеломы - клоны, образованные при делении единичных измененных опухолевых В-клеток, синтезируемые МкАТ неизвестной специфичности и обладающие способностью к неограниченному размножению.


Слайд 21
Клетки плазмоцитомы для гибридизации получают путем мутагенеза. Должны обладать
Текст слайда:


Клетки плазмоцитомы для гибридизации получают путем мутагенеза. Должны обладать устойчивостью к токсичным аналогам азотистых оснований, входящих в состав ДНК.


Слайд 22
2. Иммунизация мышей антигеном	Иммунизация стимулирует формирование иммунного ответа и выраженное антителообразование.Антиген
Текст слайда:

2. Иммунизация мышей антигеном

Иммунизация стимулирует формирование иммунного ответа и выраженное антителообразование.
Антиген вводят в/в, в/б, п/к с адъювантом (в-вом, усиливающим иммуногенность антигенов) или без него в нарастающей дозе.


Слайд 23
3. Получение клеток селезенки	Лимфоидная ткань селезенки мыши способствует накоплению плазматических клеток,
Текст слайда:

3. Получение клеток селезенки

Лимфоидная ткань селезенки мыши способствует накоплению плазматических клеток, синтезирующих антитела.
Через 4 дня после инъекции антигена мышей убивают, селезенку извлекают, измельчают и готовят суспензию, содержащую аминокислоты, витамины, углеводы, неорганические соли.


Слайд 24
4. Гибридизация клеток миеломы и В-лимфоцитов. 	Лимфоциты селезенки и клетки миеломы
Текст слайда:

4. Гибридизация клеток миеломы и В-лимфоцитов.

Лимфоциты селезенки и клетки миеломы смешивают, осаждают центрифугированием, готовят суспензию, выдерживают 30-40 минут при 370С, повторно центрифугируют.
Для слияния клеток добавляют к среде ПЭГ и CaCl2 , обеспечивающие перераспределение мембранных белков, обеспечивая контакт и слияние клеток.


Слайд 25
5. Селекция гибридом на среде ГАТ	Осадок клеток ресуспендируют в среде ГАТ,
Текст слайда:

5. Селекция гибридом на среде ГАТ

Осадок клеток ресуспендируют в среде ГАТ, содержащей:
гипоксантин (Г),
аминоптерин (А),
тимидин (Т),
разливают в лунки микропланшет и инкубируют при 370С в атмосфере СО2 в течение 10-16 дней.


Слайд 26
Каждые 4 дня проводят замену среды в лунках.
Текст слайда:



Каждые 4 дня проводят замену среды в лунках.


Слайд 27
Аминофолиевая кислота оказывает цитостатическое действие, ингибирует биосинтез пуринов, тимина и др.
Текст слайда:

Аминофолиевая кислота оказывает цитостатическое действие, ингибирует биосинтез пуринов, тимина и др. аминокислот.
Гипоксантин и тимидин добавляют в среду в качестве предшественников пуринов и пиримидинов.


Слайд 28
1. Неслившиеся лимфоциты отмирают после гибридизации, т.к. не способны выживать in
Текст слайда:

1. Неслившиеся лимфоциты отмирают после гибридизации, т.к. не способны выживать in vitro.
2. Выживают непрерывно растущие клоны гибридных клеток.
3. Подсчет количества клонов в лунках проводят с помощью микроскопа.


Слайд 29
6. Определение антителообразующей способности гибридом  Идентификацию клеток, синтезирующих антитела, проводят
Текст слайда:

6. Определение антителообразующей способности гибридом Идентификацию клеток, синтезирующих антитела, проводят с помощью гибридомной технологии. Наличие антител определяют в надосадочных фракциях культуральной среды в лунках микропланшет. Отбирают 50 мкл среды. Определение антител проводят методом радиоиммуноанализа (РИА) или иммуноферментного анализа (ИФА)



Слайд 30
7. Клонирование гибридом		Гибридомы клонируют методом предельных разведений. Клетки ресуспендируют в среде
Текст слайда:

7. Клонирование гибридом

Гибридомы клонируют методом предельных разведений.

Клетки ресуспендируют в среде с добавлением сыворотки крови плода коровы и затем разводят этой же средой.
В каждую лунку должна попасть клетка, содержащая 1 клон гибридом.


Слайд 31
8. Накопление клеток, синтезирующих МкАТ	Гибридомы легко культивируются в замороженном состоянии в
Текст слайда:

8. Накопление клеток,
синтезирующих МкАТ
Гибридомы легко культивируются в замороженном состоянии в жидком азоте при -700С в среде, содержащей сыворотку крови и 1% диметилсульфоксид.


Слайд 32
9. Крупномасштабное культивирование гибридом и накопление МкАТ:  Способы: 1. Инкубирование
Текст слайда:

9. Крупномасштабное культивирование гибридом и накопление МкАТ: Способы: 1. Инкубирование в аппаратах эрлифтного типа (суспензия клеток-антителопродуцентов перемешивается путем подачи СО2 и воздуха). 2. Совмещение эрлифтного культивирования с микрокапсулированием (гибридомы иммобилизуют на стеклянном матриксе, в капсулах агарозы; цикл культивирования – 1 месяц., выход антител – 59-250 мг/мл).



Слайд 33
3. Мембранно-перфузионный способ (фирма «Millipor»). Гибридомы достаточно стабильны и выход МкАТ высокий.
Текст слайда:

3. Мембранно-перфузионный способ
(фирма «Millipor»). Гибридомы достаточно стабильны и выход МкАТ высокий.


Слайд 34
10. Очистка. Современные способы разделения:  1. Центрифугирование; 2. Мембранная фильтрация и др.
Текст слайда:

10. Очистка. Современные способы разделения: 1. Центрифугирование; 2. Мембранная фильтрация и др.



Слайд 35
В терапии опухолей используют два типа МкАТ: простые — МкАТ, не
Текст слайда:

В терапии опухолей используют два типа МкАТ:
простые — МкАТ, не связанные ни с какими цитотоксическими веществами;
конъюгированные — МкАТ, лечебный эффект которых обусловлен присоединенными к антителу веществами (радиоактивными частицами, цитостатиками или токсинами).


Слайд 36
Ритуксимаб (Ритуксан (США), Мабтера (Россия)) - первым МкАТ, применяемый в онкологии.
Текст слайда:

Ритуксимаб (Ритуксан (США), Мабтера (Россия)) - первым МкАТ, применяемый в онкологии. Ритуксимаб — это химерное МкАТ (мышиный и человеческий МкАТ).

Алемтузумаб (Мабкэмпас, Кэмпас (Россия)) — гуманизированное МкАТ к антигену CD52. Предназначен для лечения хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) у взрослых.


Слайд 37
Кэмпас используется для уменьшения реакции «трансплантат против хозяина».
Текст слайда:

Кэмпас используется для уменьшения реакции «трансплантат против хозяина».


Слайд 38
Трастузумаб (Герцептин (Россия)) - первый гуманизированный антителом, зарегистрированным для лечения солидных
Текст слайда:

Трастузумаб (Герцептин (Россия)) - первый гуманизированный антителом, зарегистрированным для лечения солидных опухолей - собирательное обозначение опухолей, которые имеют определенную локализацию - место расположения, и этим отличаются от другой группы - опухолевых заболеваний кроветворной и лимфоидной ткани - лейкозов.
Трастузумаб — рекомбинантные гуманизированные МкАТ против HER2/neu-рецепторов, принадлежащих к рецепторам эпидермального фактора роста.


Слайд 39
Бевацизумаб (Авастин (Россия)) - рекомбинантный гуманизированный МкАТ, способен угнетать рост опухоли,
Текст слайда:

Бевацизумаб (Авастин (Россия)) - рекомбинантный гуманизированный МкАТ, способен угнетать рост опухоли, обладает цитостатическим и цитотоксическим эффектом.
Цетуксимаб (Эрбитукс (Россия)) — химерное МкАТ, блокирующее активацию рецептора эпидермального фактора роста. Применяют для лечения рака толстой кишки,опухолей головы и шеи.


Слайд 40
МкАТ как носители активных веществ 	МкАТ применяют для доставки цитотоксических веществ
Текст слайда:

МкАТ как носители активных веществ

МкАТ применяют для доставки цитотоксических веществ к опухолевым клеткам.
Преимущества:
1. Позволяет избежать повреждения здоровых тканей;
2. Усиливает противоопухолевый эффект цитостатиков.
3. Способствует проникновению глубоко в ткани опухоли антител.


Слайд 41
Современные конъюгированные МкАТ подразделяют на следующие группы: с радиоактивными частицами (радиоиммунотерапии);
Текст слайда:

Современные конъюгированные МкАТ подразделяют на следующие группы:
с радиоактивными частицами (радиоиммунотерапии);
с цитостатиками;
с токсинами (или иммунотоксинами).

Зарегистрировано два МкАТ, соединенных с радиоактивными частицами.


Слайд 42
Зевалин — МкАТ против CD20, соединенное с иттрием-90. 	Обеспечивает более
Текст слайда:

Зевалин — МкАТ против CD20, соединенное с иттрием-90.
Обеспечивает более высокую эффективность по сравнению с терапией простым антителом к CD20.


Слайд 43
Тозитумомаб (Бексар) — мышиные МкАТ к антигену CD20, к которым прикреплен
Текст слайда:

Тозитумомаб (Бексар) — мышиные МкАТ к антигену CD20, к которым прикреплен радиоактивный изотоп йода-131. Препарат получил одобрение для лечения рецидивов фолликулярных лимфом.


Слайд 44
Иммунотоксины получают присоединением к МкАТ бактериальных (дифтерийного токсина, экзотоксина синегнойной палочки)
Текст слайда:

Иммунотоксины получают присоединением к МкАТ бактериальных (дифтерийного токсина, экзотоксина синегнойной палочки) или растительных токсинов (рицина А или сапорина).
Милотарг – иммунотоксин, применяемый в терапии острого миелобластного лейкоза у пожилых. Милотарг представляет собой человеческие антитела к антигену CD33.


Слайд 45
БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!
Текст слайда:

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!


Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика