Слайд 1
ЗАПОРОЖСКИЙ  ГОСУДАРСТВЕННЫЙ 
МЕДИЦИНСКИЙ  УНИВЕРСИТЕТ
Кафедра  клинической  лабораторной диагностики
                                                            
                                    МОРФОЛОГИЯ КЛЕТОК ГРАНУЛОЦИТАРНОГО РЯДА
ЗАПОРОЖЬЕ
2016
кандидат медицинских  наук,  доцент 
Беленький  Сергей  Андреевич
                                
 
                            							
														
						 
											
                            Слайд 2Гранулоци́ты  (зернистые лейкоциты)  —  подгруппа белых клеток крови, характеризующихся
                                                            
                                    наличием крупного сегментированного ядра и присутствием в цитоплазме специфических гранул, выявляемых в световой микроскоп при обычном окрашивании.
                                
                            							
							
							
						 
											
                            Слайд 3
ГРАНУЛОЦИТЫ
СЕГМЕНТОЯДЕРНЫЕ
 НЕЙТРОФИЛ  ЭОЗИНОФИЛ   БАЗОФИЛ
Гранулы представлены крупными лизосомами и
                                                            
                                    пероксисомами, а также видоизменениями этих органоидов.
                                
 
                            							
														
						 
											
                            Слайд 4
Гранулоциты  — наиболее многочисленные представители лейкоцитов, их количество составляет 50-80% всех
                                                            
                                    белых кровяных клеток. 
Размеры зрелых зернистых лейкоцитов —10–16 мкм. 
Норма содержания в крови —    2–8x109 гранулоцитов в литре.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 5Гранулоциты образуются в костном мозге из общей клетки-предшественника. 
Индукторы гранулоцитопоэза  —
                                                            
                                    ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-5,  грануллоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ, GM-CSF) и гранулоцит-стимулирующий фактор (Г-КСФ, G-CSF). 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 6Ответ на стимуляцию выражается в виде 3-5 делений клеток-предшественниц (4 суток)
                                                            
                                    и морфологическом дозревании  (5 суток)  — итого 9 суток.
Выходя в кровеносное русло, гра-нулоциты практически сразу делят-ся на два равных пула: активно циркулирующий и пристеночный (клетки, находящиеся в состоянии прилипания к поверхности венул).
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 7Динамическое равновесие пулов регулируется агентами, усиливаю-щими пристеночное стояние (хемо-кины ИЛ-1, ИЛ-8,
                                                            
                                    ФНО, гамма-ин-терферон) и ингибирующими его (гл. обр., кортикостероиды).
Пристеночное стояние  — это первый шаг перед выходом из кровеносного русла в ткани. Средний полупериод циркуляции гранулоцитов – 6-7 дней, в тканях они живут в среднем 2 дня.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 8ГРАНУЛОЦИТОПОЭЗ
Морфологически неидентифицируемые клетки:
   плюрипотентная  стволовая клетка крови
 
                                                            
                                     мультипотентная коммитиро-ванная  частично  детерминиро-ванная клетка (родоначальная клетка миелопоза – КОЕ-ГЭММ)
   унипотентная коммитирован-ная  детерминированная  клетка (КОЕ-Гн,  КОЕ-Эо,  КОЕ-Б) 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 9Морфологически неидентифицируемые клетки нельзя различить обычными методами под световым или электрон-ным
                                                            
                                    микроскопом (любая из них вы-глядит как малый лимфоцит), но они имеют свой фенотип (антигенный профиль). Напр., для СКК характерно присутствие на поверхности маркеров CD34+, CD59+, Thy1/CD90+, C-kit/ CD117+ и отсутствие маркеров, свойственных зрелым клеткам крови (Lin-негативность); 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 10Благодаря определенному фенотипу (антигенному профилю)  морфологически неидентифицируемые  клетки 
можно
                                                            
                                     выявить методом иммуноцитохимии 
(иммунологический  анализ  цитологи-ческого  материала  проводится  с помощью  меченых  моноклональных антител  в  условиях  сохранения морфологии  клеток)  –  один из  видов иммунохимических методов: иммуноферментного, иммунофлюо-ресцентного, радиоиммунного  и т.п.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 11ГРАНУЛОЦИТОПОЭЗ
Морфологически идентифицируемые клетки:
 миелобласт (не имеет гранул)
 промиелоцит (первичные  азу-рофильные
                                                            
                                     гранулы)
 миелоцит (появление  специфи-ческих гранул, округлое ядро)
 метамиелоцит (бобовидное ядро)
 палочкоядерный лейкоцит
 сегментоядерный лейкоцит
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 12
Процессы, происходящие по мере созревания гранулоцитов:
  уменьшение размеров клетки
 
                                                            
                                    изменение формы их ядер (от округлой до сегментированной)
  изменение  ядерно-цитоплаз-матического соотношения
  накопление и изменение со-става гранул в цитоплазме (по-степенное увеличение доли  специ-фических гранул) 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 13
Процессы, происходящие по мере созревания гранулоцитов:
  утрата способности к 
                                                            
                                    деле-нию
  нарастание подвижности кле-ток
  приобретение разнообразных рецепторов плазмолеммы, обес-печивающих выполнение глав-ных функций клеток (фагоцитоз, хемотаксис и др.).
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 14Миелобласт – диаметр 15-20 мкм. Ядро округлое красно-фиолетового цвета с нежно-сетчатой
                                                            
                                    структу-рой хроматина и 2-5 ядрышками сине-голубого цвета, занимает бо́льшую часть клетки (7:1; 4:1), узкий поясок ярко-синей (базо-фильной) цитоплазмы с неболь-шим количеством красной (азуро-фильной) зернистости.   Цитохимически – положительная реакция на миелопероксидазу.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 15Промиелоцит – самая крупная клетка (25 мкм). Овальное светло-фиолетовое ядро в
                                                            
                                    центре или эксцентрично; хроматин мелко-сетчатый с утолщенными участ-ками; ядрышки  нечёткие. Цито-плазма голубого цвета с перинук-леарной зоной просветления и обильной азурофильной красно- фиолетовой зернистостью, наслаи-вающейся на ядро. Ядерно-цито-плазматический индекс  5 : 1; 2 : 1.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 16На начальных этапах развития про-миелоцита эозинофильные гранулы содержат большое количество базо-фильного
                                                            
                                    вещества, воспринимающего щелочную (синюю) краску, поэтому большинство гранул оказываются окрашенными в грязновато-синий цвет. При крупной базофильной зернистости в цитоплазме промиелоцита, нередко покрывающей и ядро, его можно ошибочно отнести к базофильному типу, а при крупной эозинофильной зернистости  — к эозинофильному. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 17
Во избежание ошибок следует учитывать не только окраску, но и размеры
                                                            
                                    и форму гранул:            в клетках эозинофильного ряда они правильной округлой формы и одинакового размера, а в клетках базофильного ряда величина их колеблется от мелких точечных до крупных хлопьевидных образований неправильной формы, располагающихся и на ядре, и в цитоплазме. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 18Нейтрофильный миелоцит (12-18 мкм). Овальное (иногда с вдавлением) тёмно-фиолетовое ядро в
                                                            
                                    центре или эксцентрично; хроматин грубый; ядрышек  нет. Цитоплазма голубовато-красная с ацидофильной и нейтро-фильной зернистостью разных от-тенков (наряду с первичными появля-ются вторичные (специфические) гранулы); чёткая перинуклеарная зона  просветления. Ядерно-цитоплазма-титический индекс  3 : 1; 3 : 2.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 19Эозинофильный миелоцит (12-18 мкм). Овальное (иногда с вдавлением) красно-пурпурное ядро в
                                                            
                                    центре или эксцентрично; хроматин грубый; ядрышек  нет. Цитоплазма розовато-синяя с многочисленными крупными округлыми специфическими оранжево-коричневыми гранулами);  может   быть незначительное количество неспецифических синих гранул. Ядерно-цитоплазматитический индекс  3 : 1; 3 : 2.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 20
Базофильный миелоцит (12-15 мкм). Его ядро напоминает ядро нейтро-фильного миелоцита, но
                                                            
                                    отличается некоторым набуханием, из-за чего де-тали структуры менее четкие. Кроме базофильного вещества в цитоплазме можно обнаружить немного коричнева-то-фиолетовых нитей. Зернистость от-личается от зернистости зрелого базо-фила более резко выраженными коле-баниями в оттенках цвета зерен (тем-но-синяя, синяя и сине-розовая), рас-полагающихся в цитоплазме  и ядре. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 21
Различают материнские (незрелые)   и дочерние  (зрелые)  миелоциты.
                                                            
                                    Материнские – это более крупные клетки, по морфологиии близки к промиелоцитам; дочерние – более мелкие, образующиеся в результате деления и созревания материнских форм. 
Дочерний миелоцит – последняя клетка  в гранулоцитарном ряду, способная к делению (!!!) 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 22Нейтрофильный метамиелоцит –10-16 мкм диаметром.      
                                                            
                                     Бобо- или почковидное тёмно-пурпурное ядро в центре; хроматин грубый, неравномерный, глыбчатый; ядрышек  нет. Цитоплазма розово-голубоватого цвета с обильной мелкой азурофильной красно-фиолетовой зернистостью. 
Ядерно-цитоплазматический индекс  7 : 3; 1 : 1.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 23Эозинофильный метамиелоцит –10-16 мкм диаметром.      
                                                            
                                     Бобо- или почковидное тёмно-пурпурное ядро в центре; хроматин грубый, сине-чёрный, глыбчатый; ядрышек  нет. Цитоплазма розово-голубоватого цвета с многочисленными гранулами красно-оранжевой окраски средней интенсивности. 
Ядерно-цитоплазматический индекс  7 : 3; 1 : 1.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 24Базофильный метамиелоцит – 10-16 мкм диаметром.     
                                                            
                                      Бобо- или почковидное тёмно-пурпурное ядро в центре; хроматин грубый, сине-чёрный, глыбчатый; ядрышек  нет. Цитоплазма розово-голубоватого цвета с немногочисленными крупными гранулами сине-чёрной окраски.  Ядерно-цитоплаз-матический индекс  7 : 3; 1 : 1.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 25Палочкоядерный нейтрофил – 10-16 мкм диаметром. Палочковид-ное или изогнутое тёмно-фиолето-вое ядро
                                                            
                                    в центре с одинаковым диаметром по длине; хроматин грубый, конденсированный, крупно-глыбчатый; ядрышек  нет. Цито-плазма розового цвета с обильной пылевидной нейтрофильной сине-фиолетовой зернистостью. 
Ядерно-цитоплазматический индекс  1 : 1; 1 : 2.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 26Палочкоядерный эозинофил – 10-16 мкм диаметром. Палочковид-ное или изогнутое тёмно-пурпурное ядро
                                                            
                                    в центре с одинаковым диаметром по длине; хроматин грубый, конденсированный, крупно-глыбчатый; ядрышек  нет. Цито-плазма розового цвета с многочисленными оранжево-красными гранулами. 
Ядерно-цитоплазматический индекс  1 : 1; 1 : 2.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 27Палочкоядерный базофил  – 10-16 мкм диаметром. Палочковидное или изогнутое тёмно-пурпурное
                                                            
                                    ядро в центре с одинаковым диаметром по длине; хроматин грубый, конденсированный, крупно-глыбчатый; ядрышек  нет. Цито-плазма розовато-голубого цвета с немногочисленными крупными синевато-фиолетовыми и сине-чёрными гранулами. Ядерно-цитоплазматический индекс 1:1; 1:2.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 28Сегментоядерный нейтрофил – 10-15 мкм диаметром.     
                                                            
                                      Дольчатое тёмно-фиолетовое ядро в центре состоит из 2-5 сегментов с тонкими перемычками; хроматин конденсированный, плотно-компакт-ный; ядрышек  нет. Цитоплазма синевато-розового цвета с обильной пылевидной нейтро-фильной розовато-фиолетовой зернистостью. Ядерно-цитоплаз-матический индекс  1 : 3; 1 : 5.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 29Сегментоядерный эозинофил – 10-15 мкм диаметром.     
                                                            
                                      Дольчатое тёмно-пурпурное ядро в центре состоит из 2-3 сегментов с тонкими перемычками; хроматин конденсированный, плотно-компактный; ядрышек  нет. Цитоплазма розоватого цвета с многочисленными крупными круглыми оранжево-красными гранулами. Ядерно-цитоплаз-матический индекс  1 : 3; 1 : 5.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 30Сегментоядерный базофил –   10-16 мкм диаметром.   
                                                            
                                        Дольчатое тёмно-пурпурное ядро в центре, обычно из 2 сегментов с мостиком-перемычкой; хроматин конденсированный, плотно-компактный; ядрышек  нет. Цитоплазма розовато-голубая с немногочисленными крупными тёмными сине-чёрными гранулами. Ядерно-цитоплазматический индекс  1 : 3; 1 : 5.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 31Миелоцит, метамиелоцит, палочкоядерный и сегменто-ядерный нейтрофилы. 
сегментоядерные эозинофил  и базофил
                                                            
                                                                    
                            							
														
						 
											
                            Слайд 32Дифференциация  миелоцита с вда-влением в ядре от метамиелоцита
Мысленно округляем ядро
                                                            
                                    и определяем его центр. В миелоците выемка в ядре не достигает центра. В метамиелоците вдавление более выражено и соприкасается с предпо-лагаемым центром ядра или выходит за его пределы.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 33Отличие метамиелоцита от палочкоядерного гранулоцита заключается в том, что у метамиело-цита
                                                            
                                    поперечник ядра укладывается в длинник ядра до 3 раз, а у палочкоядерного гранулоцита –   более 3 раз.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 34У сегментоядерного гранулоцита (в отличие от палочкоядерного) ядро состоит из 2-5
                                                            
                                    сегментов и хроматино-вых мостиков, толщина которых менее 1/3 толщины ядерного сегмента. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 35Если ядро имеет Т- или Y-образную форму, представлено в виде узла
                                                            
                                    или наслаивающихся сегментов, клетку относят к сегментоядерной. 
Подобные ситуации встречаются преимущественно среди сегментоядерных нейтрофилов. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 36Виды гранулоцитарных гранул:
Азурофильные (первичные) – разно-видность лизосом; содержат типичные для них
                                                            
                                    гидролитические ферменты – β-глюкуронидазу, кислую протеазу, кислую фосфатазу, арил-сульфатазу, кислую β-глицерофосфат-дегидро-геназу. Кроме того, содержат миело-пероксидазу и лизоцим (муромидазу), оказывающие бактерицидное действие. По мере созревания клетки их число уменьшается; в зрелых нейтрофилах их 10-20% от общего числа гранул. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 37Виды гранулоцитарных гранул:
Специфические нейтрофильные (вторичные) гранулы — их количество возрастает по
                                                            
                                    мере специализации клетки и во взрослых нейтрофилах составляет 80-90% от общего числа гранул. Имеют округлую, овальную или гантелевидную форму.               В них нет лизосомальных ферментов и пероксидазы, но имеются щелочная фосфатаза, основные катионные белки, фагоцитины, лактоферрин, лизоцим, аминопептидазы.
. 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 38Виды гранулоцитарных гранул:
   Поэтому, маркерами специфических нейтрофильных гранул 
                                                            
                                                           могут служить щелочная фосфатаза и катионные белки,                 а первичных азурофильных гранул кислая фосфатаза и миелопероксидаза.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 39Цитохимические маркерные реакции
   щелочная    миелопероксидаза
 
                                                            
                                      фосфатаза
                                
                            							
														
						 
											
											
                            Слайд 41Поверхностные маркеры
CD11b – интегрин адгезии с эндотелием
CD13 – антиген миелоидных клеток
CD14
                                                            
                                    – гликозил-фосфатидил-инозитол-связанный белок-корецептор, распо-знающий бактериальные ЛПС
CD15 (дисахарид) – участвует в  хемо-таксисе, фагоцитозе
CD16 – низкоафинный Fс рецептор
CD33 – семейство иммуноглобулинов; внутриклеточный участок вовлечен в ингибирование клеточной активности (апоптоз клеток при ОМЛ) 
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 42Поверхностные маркеры
CD45 – общий лейкоцитарный антиген (тирозиновая протеинфосфатаза С – компонент
                                                            
                                    сигнальных путей)
CD59 – ингибитор мембраноатакующего комплекса (протектин), регуляторный белок системы комплемента.
CD90 – опосредует адгезию лейкоцитов
CD117 – цитокиновый рецептор фактора роста стволовых клеток, тирозинкиназа (активация сигнального пути клеточно-го выживания, пролиферации и диф-ференцировки)