Микробиология. Метод Циля — Нельсена презентация

— Нельсена

Ф-124
Чубей Ольга
2016 г

(возбудителей туберкулёза, микобактериозов, лепры), актиномицетов и других кислотоустойчивых микроорганизмов.
Метод назван именами немецких медиков — микробиолога Франца Циля и патологоанатома Фридриха Нельсена, которые разработали его в 1882—1883 гг.

в Лейпцигском университете, где спустя 22 года получил докторскую степень. Позже Ф. Нельсен стал профессором института патологии Ростокского университета. В 1883 году совместно с Францем Цилем разработал метод окраски кислотоустойчивых бактерий, широко применяемый в диагностике туберкулёза.
Умер от туберкулёза гортани[1].

Циль создал в 1882 году карболфуксиновый краситель для окрашивания возбудителя туберкулёза. В 1883 году совместно с патологом Фридрихом

разведёнными растворами красителей. Для облегчения проникновения красителя в клетки микроорганизмов нанесённый на препарат карболовый фуксин Циля подогревают над пламенем горелки. Окрашенные микроорганизмы не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и спирта.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Моча, мокрота, спинномозговая жидкость, серозные жидкости полостей.

основного фуксина с 2 — 3 каплями глицерина, добавить по каплям 10 мл 96- этилового спирта.
Раствор 2. Рабочий раствор фенола (5 % водный раствор):
расплавить 5 г кристаллического фенола путём легкого подогревания на водяной бане. Добавить слегка подогретую дистиллированную воду до объема 100 мл.
Раствор 3. Рабочий раствор карболового фуксина:
в 90 мл полученного раствора фенола (2) добавить 10 мл насыщенного раствора фуксина.
Раствор 4. Обесцвечивающие растворы:
а) Раствор серной кислоты
К 75 мл дистиллированной воды осторожно долить 25 мл
концентрированной серной кислоты, постепенно наслаивая её по стенкам
сосуда. Смешать. Содержимое нагреется.
б) Раствор солянокислого спирта
Вместо раствора серной кислоты для обесцвечивания можно
использовать 3% солянокислый спирт: Этиловый спирт 96- 97 мл Концентрированная соляная кислота 3 мл. К 97 мл спирта осторожно добавляют 3 мл концентрированной соляной кислоты.
Раствор 5. Рабочий раствор метиленового синего:
растворить 0,3 г хлорида метиленового синего в 100 мл дистиллированной воды.

можно наблюдать палочки, окрашенные в красный цвет, как правило, расположенные под углом друг другу, кучками или изолированно на синем фоне мазка

Кирпично-красные палочки — возбудители лепры (проказы) Mycobacterium leprae. Взяты из поражённой лепрой кожи 

просматривать не менее 100 полей зрения, чтобы дать количественную оценку препарату и обнаружить единичные микобактерии. В том случае, если результат такого исследования оказывается отрицательным, для подтверждения просматривают дополнительно 200 полей зрения. При значительном количестве кислотоустойчивых микобактерий достаточно исследовать 20 — 50 полей зрения как при окраске по Циль-Нильсену, так и при люминесцентной микроскопии (см. таблицу). При микроскопическом исследовании препарата необходимо быть уверенным, что ни одно поле зрения препарата не просматривается повторно, поэтому рекомендуется просматривать препарат всегда по одной и той же схеме:
либо 3 параллельных прохода по длине препарата;
либо 9 параллельных проходов по ширине.
Просматривать препарат начинают с левого верхнего выбранного в мазке поля зрения, постепенно передвигаясь либо вдоль продольной оси препарата до конца мазка, либо смещаясь вниз и затем вновь поднимаясь вверх и т. д., проходя все поля зрения до границы мазка. При увеличении микроскопа 1000x, то есть 100x для масляно-иммерсионного объектива и 10x для окуляра, при исследовании одной длины мазка (~ 20 мм) за один продольный проход просматривается около 100—120 полей зрения (диаметр поля зрения — 0,16 — 0,2 мм).

мкм, шириной 0,2-0,6 мкм, гомогенные или зернистые с незначительно закругленными концами. 
Наряду с изменчивостью морфологии микобактериям туберкулеза свойственна широкая изменчивость и других признаков, в частности весьма характерного для них признака кислотоустойчивости.  Кислотоустойчивость выявляется с помощью только специальных методов окраски, основным из которых является метод Циля — Нильсена. При окраске по Цилю — Нильсену кислотоустойчивые микробактерии туберкулеза выглядят ярко-красными на синем фоне препарата.