Методы выявления возбудителей туберкулеза и микобактериоза презентация

M. tuberculosis complex

Определение ЛЧ

21-28
дней

Среда Л-Й

Окраска по Цилю-Нильсену

Окраска люминесцентными красителями

Число кислотоустойчивых бактерий (КУБ), обнаруживаемых при микроскопическом исследовании, важный показатель, характеризующий степень эпидемической опасности больного и тяжесть заболевания

Молекулярно-
генетические




Выявление ДНК возбудителя
в диагностическом материале



ПЦР 1-2 дня

Полож ите л ьные :
яркое оранжевое свечение на дне пробирки и оранжевое отражение в колене пробирки О2 мало

Отрицательные:

незначительное или полное отсутствие свечения

О2 много

Идентификация НТМ до вида:
•технология ДНК-стрипов (Hain-test)
•масс-спектрометрия

Медленнорастущие видимый рост на среде более, чем через 7 дней



1. Фотохромогенные 2. Скотохромогенные

Быстрорастущие видимый рост на среде более, чем через 7 дней



3. Нехромогенные

M.kansasii M.marinum M.simiae

M.gordonae M.szulgai M.scrofulaceum

M. avium complex (MAC)
M. xenopi
M. malmoense

M. chelonae
M. abscessus
M. fortuitum

11292

-5-6-5,-2-

*Mycobacterium avium Berlin 5\0_H101211SUn, "Baseline sub!."

3769

-2-8-9,-6-

2467

11297

-4-.3-..2-.7.­

7478

5652

*Mycobacterium avium D-43R 2\0_F101111SUn, "Baseline sub!."

11294

-5-6-,5-4-

*Mycobacterium avium D-43R 2\0_A11111Slln, "Baseline sub!."

4329

-11.3-1-5

-9-3-,8-3-

"Mycobacterium avium Kirchberg M-44\0_K15\3\1 SUn, "Baseline sub!."

2771

---,--

5790

---,--

5u

6731

---,--
• J. .A..

-11.2-90

-5-6-9,-1-

* Mycobacterium intracellulare 11\O_J101111sun, "Baseline sub!."

-6-4-7,-3--6--7,5-8-

7597

11309

7587

11315

2698

*Mycobacterium scrofulaceum 33\0_H15\111SUn, "Baseline sub!."

4972

5321

-4-0-,1-5- -4-3,2-9-
.l

7125

--,--

11311

-.--

2698

*Mycobacter ium scrofulaceum 27\0_F31111Slln, "Baseline sub!."

miZ

BO'DO

110' 00

9000

10000

Контроль H

R

S

E

Штамм МБТ, устойчивый ко всем препаратам



Штамм МБТ, чувствительный ко всем препаратам




Штамм МБТ,
устойчивый к RIF

На чувствительность к PZA – 21 сутки

Максимальное время исследования

на бор PZA Kit:
на 50 определений ЛЧ

аминогликозиды/циклические пептиды
этамбутол
Секвенирование гена pncA (ЦНИИЭ)
PZA

Sensititre TREK Diag
(Magellan Biosciences)

Ciprofloxacin Impinem RES Moxifloxacin Cefepime RES Cefoxitin RES
Amoxicillin/Clavulanic ac.RES
Amikacin Ceftriaxone RES Doxycycline RES Minocycline RES Tigecycline RES Tobramycin RES Clarithromycin RES

Patient 4066
M.chelonae

Ciprofloxacin RES Impinem RES Moxifloxacin RES Cefepime RES
Cefoxitin RES (sens to high conc) Amoxicillin/Clavulanic RES Amikacin RES (sens to high conc) Ceftriaxone RES
Doxycycline RES Minocycline RES Tigecycline RES Tobramycin RES Clarithromycin RES

Patient 521
M.abscessus

Trimethoprim/Sulfameth. RES
Linezolid Ciprofloxacin RES Impinem RES
Moxifloxacin RES (sens to high con
Cefepime RES
Cefoxitin RES (sens to high conc) Amoxicillin/Clavulanic RES Amikacin
Ceftriaxone RES
Doxycycline RES Minocycline RES

Tigecycline RES (sens to high conc)

Tobramycin RES (sens to high conc
Clarithromyc RES (sens to high con

Patient 3377
M.avium


Clarithromycin RES (sens to high conc)
Rifabutin Ethambutol RES Isoniazid RES Moxifloxacin RES Rifampin
Trimethoprim/Sulfamethoxazole RES Amikacin RES (sens to high conc) Linezolid RES
Ciprofloxacin RES (sens to high conc)
Streptomycin RES
Doxycycline RES
Ethionamide RES

Рифампицин (R)

rpoB

Этамбутол (E)

embCAB

Пиразинамид (Z)

pncA

Стрептомицин (S)

rpsL, rrs

Препарат

Гены

Протионамид (Pto)

inhA

Парааминосалици-
ловая кислота (PAS)

thyA

Фторхинолоны (Fq)

gyrA
gyrB

Циклосерин (Cs)

traA

Канамицин (К)

rrs

Капреомицин (Сm)
Виомицин(Vi)

tlyA

.

c

"'-

! 1; .s ·
t,. ..lC ·5 ::

II::::IIIIIII T' Iy liE : := : ;

1

s"' '2 "'

C a_ .L

2

!,- ,- 11-

t. T (!.. L
( T R l

1
'1
r t, £ 1 1

,- {' 1 'J

'1 }:2 2

t -<.4..!<..-

'
' I

r "

·' J .r( + lol-l+ - .._ ;. - v 1/

C-r ' te-e:.
6-" t.u-

+ -+- - -

IV

\J

6

4!

{)'

+- -+- ..... - v

IV

"/..

7 5- q ll

tr.." tc..c

'

14- t - 1-+- t

P-

!:.

'-1 6 4 r-

h.. fA-&

q

'f> -'B 9

tf-...c-(.

'

,...,

- -1-- t .. - v v,

tO t., 1- () >

tf.-c1.

t -+ - - v

I(

-t1

c) ') f

Jf;_

"" T -t -

- -t - v

v

11

0 >6

/_

A"

rv:

t-YJ

- -- -

+l -1- -

v I V

1
i4

fO lfl

fk X.

;i

... - +- t + -

R. I((

f -z-9

"-

.;.,

+-1+- ++

9. If'

1!.-

{ 1 q J

Ucvc '""'-

-+t -t+ -

IK
K R

1,('
1-1 7

!,- 2 r) '1

<'-«-v't.

.J. - -1- +

...

r 2 o If

?·vi -
&...ut.u

,- t- +- +

I\ 1\

1

}1)11

! -h '

I IIJ

--p ++ - ... - ..j.

5 S''

1 q

2 1C

to!/(..

llf -t- +;-+-I+

II\ I I\

'10 C7 { 2

1.-u / -

-' 11c l + I+

- + i - s s

'] 1
1 1T )'! r

C't

"' q

l. .tA&

'11 -

,/AM_. I

+ ... 4-- -t+-

R

R

2 't

s "

1.7

1', vi.::-G

lr

1 1'1 I

' ·+ - + - + +-

I R

(?..

14

('t

1?/

ft,._

Ltl ,

I I !1 I

) · v- +i-

t- (\

1:.

амплификации Амплитуб-РВ, «Синтол»)

Амплификация в термоциклере с оптическим модулем, получение результатов выявления ДНК МБТ

Внесение ДНК МБТ в ПЦР-смесь для определения мутаций в системе Tecan Freedom Evo (набор Амплитуб-МЛУ-РВ,
«Синтол» и амплификация


Анализ и выдача результатов врачам

Микроскопия

Трудозатраты – 1,5 часа

Посев на плотные или жидкие среды

Выявление

Определение ЛУ к ПТП I и II ряда

Дифференциация
МТК от НТМ

Видовая идентификация микобактерий

Определение ЛУ НТМ

•Планшет-титрование

в