место проточной цитофлюориметрии в клинической онкогематологии
- Главная
- Разное
- Дизайн
- Бизнес и предпринимательство
- Аналитика
- Образование
- Развлечения
- Красота и здоровье
- Финансы
- Государство
- Путешествия
- Спорт
- Недвижимость
- Армия
- Графика
- Культурология
- Еда и кулинария
- Лингвистика
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Маркетинг
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Место проточной цитофлюориметрии в клинической онкогематологии презентация
Содержание
- 6. диагноз классификация оценка факторов риска определение МОБ методы диагностики
- 7. цитометрия сегодня
- 8. принцип метода иммунологическая реакция
- 9. диагностика онкогематологических заболеваний оценка минимальной остаточной
- 10. -панцитопения -морфологически выявленные атипичные клетки или
- 11. эволюция проточной цитометрии
- 12. исторические «вехи» 1590 микроскоп A. Leewenhowk
- 13. Albert Coons концепция иммунофлюоресценции 1940-е
- 14. получение моноклональных антител 1975 Georges J.F. Köhler César Milstein 1985
- 15. лазер 488 нм 635
- 16. "pulse cytophotometry" (''Impulszytophotometrie''). flow cytomerty 1988
- 18. периферическая кровь
- 19. Параметры гистограммы
- 20. параметры гистограммы 3-/4+ 3+/Y- 3+/4+ 3-/4-
- 21. Материал для исследования периферическая кровь костный мозг ликвор любая суспензия клеток
- 22. доставка и хранение кровь и КМ
- 23. Гепарин vs ЭДТА
- 24. хранение комнатная ? (18 to 22 C) хранение при T
- 25. антигенная клеточная структура Париж 1982
- 26. преаналитический (оптимальная комбинация антител) пробоподготовка
- 27. анализируемый
- 28. выбор коньюгатов
- 29. проблемы потеря клеток во время «отмывания»
- 30. EGIL European Group for Immunophenotypic characterization of Leukemias WHO 2008 РМАПО
- 31. Consensual European Immunophenotyping panels for Leukemia
- 32. Should be able to recognize features compamatible
- 33. антигены Панлекоцитарный : CD45 Линейно неограниченные:
- 34. выявление антигенов на мембране клетки в цитоплазме
- 35. асинхронная – одновременная экспрессия антигенов разной стадии
- 36. Как определить линейность? MPO + CD33/13 117=
- 37. «внутренняя проверка достоверности» Т-линия CD2=CD3=CD5=CD7
- 38. домашнее задание!
- 42. HLA-DR TdT/CD34 CD19 CD10 CD5 CD20
- 44. TdT CD4/8 CD4 или CD8 CD1a
- 47. миелоидная дифференцировка
- 48. моноцитарная дифференцировка
- 49. Периферическая кровь Костный мозг
- 51. Спасибо за внимание!
диагноз классификация оценка факторов риска определение МОБ методы диагностики
Слайд 1
Место проточной цитофлюориметрии в клинической
онкогематологии
Слайд 7 цитометрия сегодня
Проточная цитометрия-измерение параметров отдельных клеток, пересекающих
одна за другой лазерный луч
FACS- Fluorescence Activated Cell Sorting
FACS- Fluorescence Activated Cell Sorting
Слайд 8 принцип метода
иммунологическая реакция антиген/антитело
особенность: АТ коньюгированы с флюорохромом
Слайд 9диагностика онкогематологических заболеваний
оценка минимальной остаточной болезни (МОБ)
оценка качества трансплантата гемопоэтических клеток
определение
субпопуляционного состава лимфоцитов
оценка жизнедеятельности микроорганизмов
оценка процессов метаболизма клетки
оценка процессов апоптоза
оценка цитокинового профиля
оценка жизнедеятельности микроорганизмов
оценка процессов метаболизма клетки
оценка процессов апоптоза
оценка цитокинового профиля
возможности проточной цитометрии
Слайд 10-панцитопения
-морфологически выявленные атипичные клетки или бласты
-лейкоцитоз
-плазмацитоз
-лимфоаденопатия
-органомегалия
-наблюдение в динамике за
пациентами с уже установленным гематологическим заболеванием
проточная цитометрия рекомендована (2006 Bethesda International Consensus)
Слайд 11эволюция проточной цитометрии
микроскопия
химические красители
электороника
компьютерная техника.
химические красители
электороника
компьютерная техника.
Слайд 12исторические «вехи»
1590 микроскоп A. Leewenhowk
1742 светорассеяние М.Ломоносов
1880 технология окрашивания P.Erlich
Стабильность
потока жидкости Rayleigh
1934 фотодетекция клеток и частиц A.Moldavan
1950 оценка размеров микроскопических частиц Coulter
1965 сортер (капельное отклонение) Flwuler
1972 FACS Herzenberg
1934 фотодетекция клеток и частиц A.Moldavan
1950 оценка размеров микроскопических частиц Coulter
1965 сортер (капельное отклонение) Flwuler
1972 FACS Herzenberg
Слайд 19Параметры гистограммы
FITC FL
PE FL
Негативная популяция
Популяция позитивная по FITC
Популяция,позитивная по PE
Дубль позитивная
популяция
Слайд 22доставка и хранение
кровь и КМ : а/коагулянт гепарин, ЭДТА
плевральная, асцитическая жидкости,
ликвор
без а/коагулянта
доставка-24 ч
без а/коагулянта
доставка-24 ч
Слайд 23Гепарин vs ЭДТА
Гепарин
- после выделения клеток на Ficoll можно использовать 72 часа
ЭДТА- меньше потерь миелоидных клеток ( не «прилипают» к стенкам пробирки , меньше тромбоцитарных агрегатов), можно использовать один и тот же материал для гематологического анализатора и морфологии
параметры светорассеяния ухудшаются быстрее в материале с ЭДТА
ЭДТА- меньше потерь миелоидных клеток ( не «прилипают» к стенкам пробирки , меньше тромбоцитарных агрегатов), можно использовать один и тот же материал для гематологического анализатора и морфологии
параметры светорассеяния ухудшаются быстрее в материале с ЭДТА
Слайд 24хранение
комнатная ? (18 to 22 C)
хранение при T
приводить к адсорбции иммуноглобулинов или к селективной потере антигенов но! Некоторые типы клеток (ЛБ) нестабильны при высокой температуре
Слайд 25 антигенная клеточная структура
Париж 1982
1 международное совещание
« Human
Leukocyte Differentiation Antigens (HLDA)»
Установлена номенклатура моноклональных
антител
На сегодняшний день идентифицировано
320 CD
Установлена номенклатура моноклональных
антител
На сегодняшний день идентифицировано
320 CD
CD-кластер дифференцировки
Слайд 26
преаналитический (оптимальная комбинация антител)
пробоподготовка
сбор данных на цитометре
анализ полученных результатов
этапы цитофлюориметричекского
исследования
Слайд 27
анализируемый образец
комбинация антител с различными
флюорохромами для выявления маркеров интереса
лизирующий раствор
пробоподготовка
Слайд 28 выбор коньюгатов
выбор
флюорохрома зависит от плотности антигена на клетке
более яркий флюорохром для редких антигенов
менее яркий- для более частых
более яркий флюорохром для редких антигенов
менее яркий- для более частых
Антиген низкой плотности
CDz
CD45
CD13 CD33 CD19
Слайд 29проблемы
потеря клеток во время «отмывания»
неполный лизис, много «debris»: липидемия,↑ретикулоцитов
( криоглобуленемия),
пхт- решение- отмыть клетки или выделить MNC, использование ДНК красителей -7-AAD , VIO 16
неспецифическое связывание
неспецифическое связывание
Слайд 31
Consensual European Immunophenotyping panels for Leukemia
Should be able to recognize
(должны
быть способны распознать)
1.Бифенотипический ОЛ
2. Острый лимфобластный лейкоз
а) В-линейный B-I, B-II, B-III, B-IV
б) Т-линейный Т-I,T-II T-III, T-IV
3. ОМЛ
а) М0
б)гранулоцитарной и моноцитарной дифференцировки
в)ОПЛ
г)эритроидный ОМЛ
д)мегакариоцитарный ОМЛ
Слайд 32Should be able to recognize features compamatible with
(должны быть способны распознать
признаки, сравнимые с:
1.ХЛЛ
2.ВКЛ
3.В-клеточные лимфомы
а) Лимфома Беркитта
б) Фолликулярная Лимфома
в) лимфома из клеток мантийной зоны
г) лимфома из клеток маргинальной зоны
д) и др….
4.Т-клеточные пролиферации
5.БГЛ
6.NK-клеточные пролиферации
Слайд 33антигены
Панлекоцитарный : CD45
Линейно неограниченные: СD34, CD 38, CD133, HLA-DR
Линейно ассоциированные:
-миелоидной
линии CD13,CD33, CD117,MPO
-лимфоидной линии CD19, CD 7, CD 56
Дифференцировочные антигены- отражают стадии дифференцировки клеток
Активационные антигены CD25, CD38
-лимфоидной линии CD19, CD 7, CD 56
Дифференцировочные антигены- отражают стадии дифференцировки клеток
Активационные антигены CD25, CD38
Слайд 35асинхронная – одновременная экспрессия антигенов разной стадии дифференцировки : CD34+/CD22+
аберрантная
- одновременная экспрессия антигенов разной линии дифференцировки : CD19+/CD5+
эктопическая- одновременная экспрессия антигенов разного «места жительства» : CD1a в КМ
эктопическая- одновременная экспрессия антигенов разного «места жительства» : CD1a в КМ
экспрессия антигенов
Слайд 36Как определить линейность?
MPO + CD33/13 117= миелоидный
cytCD79a/cytCD22+CD19= В-линейный
Cyt СD3+CD7= Т-линейный
НО!!
ОМЛ с
t(8;21) часто CD19+
ОМЛ t(15;17) часто CD2+
ОМЛ t(15;17) часто CD2+
Слайд 37«внутренняя проверка достоверности»
Т-линия CD2=CD3=CD5=CD7
В-линия CD19=CD20= CD22
(CD23 ,FMC7 реагируют с субпопуляцией)
моноциты CD33br = CD14br и CD4+/CD3-
нейтрофилы CD15 = CDw65br
эритроидные CD45(neg)= CD235
CD4+ CD8= CD3
CD19/kappa +CD19/lambda= CD19
T+ B+NK = кол-во лимфоцитов CD45+/CD14-
моноциты CD33br = CD14br и CD4+/CD3-
нейтрофилы CD15 = CDw65br
эритроидные CD45(neg)= CD235
CD4+ CD8= CD3
CD19/kappa +CD19/lambda= CD19
T+ B+NK = кол-во лимфоцитов CD45+/CD14-
Слайд 42
HLA-DR
TdT/CD34
CD19
CD10
CD5
CD20
CD38
CD79a
CD22
лимф. стволовая клетка
Про-В
Пре-В
промежуточная
В-клетка
плазматическая В-клетка
зрелая В-клетка
cyIgM
sIg
cyCD22
дифференцировка В-лимфоцитов
CD138
Слайд 44
TdT
CD4/8
CD4 или CD8
CD1a
протимоцит
common
тимоцит
зрелый
тимоцит
активированный
Т-лимфоцит
хелперный/
супрессорный
T-лимфоцит
sCD3
CD5
дифференцировка Т-лимфоцитов
HLA-DR
cyCD3
CD2, CD7
Лимфоидная стволовая
клетка
