Слайд 1ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ0
И РЕЗУС
Слайд 2Группа крови —
это определенное сочетание врожденных антигенных свойств содержащихся в клетках
крови, и антител к ним, находящихся в плазме (сыворотке).
Две важнейшие классификации группы крови человека — это система AB0 и резус-система.
Слайд 3СИСТЕМА АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ АВО
Данная система находится в перечне
29 систем эритроцитов человека. Является основной из всех изученных и возглавляет список групп крови человека.
Система АВО была открыта венским биологом Карлом Ландштейнером в 1901г
Основанием для ее открытия послужили наблюдения за возможностью взаимодействия эритроцитов крови и сыворотки между собой, образуя в некоторых случаях конгломераты, склеенные эритроциты в сывороточной среде.
Слайд 41901 год Ландштейнер впервые опубликовал наблюдения о существовании различий среди эритроцитов
человека.
Свойство образовывать конгломераты было названо им положительной реакцией агглютинации.
По этому признаку Ландштейнер разделил людей на 3 группы: А, В и С.
1906 год Ян Янский, исследуя групповую принадлежность больных, установил наличие 4 группы крови и предложил классификацию I ,II, III, IV.
Слайд 5Составляющие характеристики
Антигены крови- А,В,О(Н) являются генетически закрепленным свойством форменных элементов крови,
проявляющемся в иммунном ответе и способности взаимодействия со специфичными антителами
Антитела системы АВО -это белковые молекулы, представлены анти А и анти В антителами и реагирующие со специфическими им антигенными детерминантами эритроцитов своим активным центром.
Слайд 6ПРАВИЛО ЛАНДШТЕЙНЕРА:
Здоровые индивиды имеют в сыворотке АВ0 антитела к
антигенам, отсутствующим на их эритроцитах.
Слайд 7 Кровь каждого человека принадлежит к какой-либо из
4-х групп системы АВО в зависимости от присутствия на эритроцитах антигенов А и В и соответствующих антител анти-А и анти-В в плазме.
в группе 0(I) отсутствуют оба антигена и обнаруживаются антитела против обоих антигенов, анти-А и анти-В антитела.
в группе А(II) - на эритроцитах присутствует только антиген А и анти-В антитела.
в группе В(III) - на эритроцитах присутствует только антиген В и антитела анти-А.
в группе АВ(IV) - на эритроцитах одновременно присутствуют оба антигена - А и В а антитела отсутствуют.
Слайд 8НАЛИЧИЕ АНТИГЕНОВ НА ЭРИТРОЦИТАХ И АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ У РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП
КРОВИ
Слайд 9Методы определения групп крови АВО
Приказ №2 МЗРФ от 09.01.98г « Об
утверждении инструкций по иммуносерологии» определяет алгоритм исследований на данную характеристику крови. Первичное исследование выполняется во время взятия крови «сертифицированным специалистом, имеющим подготовку по данному разделу работы» и фиксируется в сопроводительном направлении.
Также образец венозной крови, передается в лабораторию, где исследование повторяется, уточняется резус принадлежность и группа крови.
Слайд 10СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ АВ0:
по антигенам, содержащихся в исследуемых эритроцитах, в
этом случае используют моноклональные антитела;
по антителам , содержащимся в исследуемой сыворотке крови, в этом случае используют стандартные эритроциты групп крови А, В, 0.
Слайд 11ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВ0 ПРИ ПОМОЩИ
МОНОКЛОНАЛЬНЫХ РЕАГЕНТОВ (цоликлонов)
В основе положительного прямого агглютинационого теста лежит реакция антиген/антитело, обусловленная присутствием специфичных компонентов, способных к взаимодействию с антигенами эритроцитов, с оценкой наличия агглютинатов (склеенных эритроцитов антителами).
Данное явление возможно, когда эритроциты носители антигена А и стандарт имеет анти А антитела или эритроциты содержащие антиген В и стандарт имеет анти В антитела.
Слайд 12ОСНАЩЕНИЕ:
моноклональные реагенты анти-А, анти-В и А+В, так же реагент анти-А1для определения
подгруппы А и АВ;
Изотонический раствор натрия хлорида 0,9%;
пластинки со смачиваемой поверхностью;
пипетки;
стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания
данное исследование выполняется при хорошем освещении стола и температуре воздуха +15°- +25°С.
Слайд 13ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Нанести по 1 большой капле (около 0,1 мл) каждого
реагента на пластинку;
Нанести по 1 маленькой капле ( около 0,03 мл) исследуемой крови (эритроцитов) рядом с каждым реагентом;
Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю крови (эритроцитов) с соответствующим реагентом;
Покачивать пластинку, результат реакции учитывать через 3 мин после окончания смешивания.
Всегда подписывать рабочий планшет( ФИО, порядок нанесения цоликлонов).
Цоликлон анти-А1 исполизовать в случае определения в ходе реакции А(II) либо АВ(IV) группы крови.
Слайд 14Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.
а) Группа крови О(I)
реакция агглютинации отсутствует со всеми образцами сывороток анти АВ, анти А и анти В. На исследуемых эритроцитах нет антигенов А и В
Слайд 15б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции с
цоликлонами анти-А и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном анти-В получен отрицательный результат. На эритроцитах присутствует антиген А
в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции с цоликлонами анти-В и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном анти-А получен отрицательный результат . На эритроцитах присутствует антиген В
Слайд 16г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми цоликлонами,
исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV). На исследуемых эритроцитах присутствуют оба антигена, А и В.
Слайд 18Перекрестный метод определения групп крови АВО
Для определения полной серологической формулы крови
используется двойная или перекрестная реакция. О группе крови АВО судят по обнаружению на эритроцитах присутствия антигенов А и В и сыворотке испытуемой крови анти А и анти В антител.
Для этого необходимы:
комплект цоликлонов АВО
комплект стандартных эритроцитов АВО
Слайд 19ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВ0 ПРИ ПОМОЩИ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ
Самостоятельного значения
метод не имеет и используется в двойной или перекрестной реакции как подтверждающий тест лабораторной диагностики.
Нанести по одной маленькой капле (10 мкл) стандартных эритроцитов O(I), A(II), B(III) под соответствующими надписями;
Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой сыворотку крови пациента (100 мкл) и поместить рядом со стандартными эритроцитами АВО, соотношение стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки - 1:10;
Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю эритроцитов с соответствующим реагентом;
Покачивать пластинку, результат реакции учитывать через 3 мин после окончания смешивания. После окончания экспозиции в те капли, где имеется агглютинация, добавить по одной капле раствора натрия хлорида, 0,9% для исключения неспецифической агглютинации.
Данное исследование выполняется при хорошем освещении стола и температуре воздуха +15°- +25°С
Слайд 20Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.
а) Исследуемая кровь принадлежит
к группе О(I), если со стандартными эритроцитами О(I) группы получены отрицательные результаты, а положительные результаты получены в реакции со стандартными эритроцитами A (II) и B(III), что говорит о наличии анти-А и анти-В антител.
Слайд 21б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции со
стандартными эритроцитами B(III) получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях с стандартными эритроцитами О(I), A(II), что говорит о наличии анти-В антител
в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции со стандартными эритроцитами А(II) получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях со стандартными эритроцитами О (I), В(III), что говорит о наличии в сыворотке анти-А антител.
Слайд 22г) В тех случаях, когда а со всеми стандартными эритроцитами получен
отрицательный результат – агглютинации нет, исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV), в исследуемой сыворотке нет анти-А и анти-В антител.
Слайд 23ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ПЕРЕКРЕСТНОГО МЕТОДА
Слайд 24ЭРИТРОТЕСТ ГРУППОКАРТ
служат для проведения экспресс-тестирования групп крови.
Основным компонентом набора
являются специальные карточки. На рабочей поверхности расположены лунки с нанесенными и высушенными моноклональными антителами ЦОЛИКЛОН IgM класса.
Слайд 25Помимо карточки в состав Набора ЭРИТРОТЕСТ-ГРУППОКАРТ входят:
Пипетка для внесения воды в
лунки;
Скарификатор;
Палочки для смешивания (5 шт.);
Инструкция по применению.
Слайд 26В каждую лунку на высушенные ЦОЛИКЛОНЫ
добавляется по 1 капле воды.
Слайд 27В каждую лунку добавляется по 1 капле исследуемой крови.
Отдельной для каждой
лунки палочкой кровь перемешивается с растворенными ЦОЛИКЛОНАМИ.
Слайд 28Сразу после смешивания в части тест-лунок начинается агглютинация эритроцитов.
Агглютинация через 30
сек.
Слайд 29Агглютинация через 2 мин 55 сек.
В контрольной лунке агглютинации нет.
Результат тестирования:
Анти-А +, Анти-В +, Анти-АВ +, Анти-D +.
Группа крови тестируемого лица: АВ(IV) Rh+.
Слайд 30ОШИБКИ ПРИ ИССДЕДОВАНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
Неправильная маркировка пробирок с кровью, взятой для
исследования (перепутывание);
Ошибочный порядок нанесения цоликлонов на пластинку, неправильная регистрация результатов исследования;
Нарушение техники исследования (неправильное соотношение моноклонального реагента и исследуемых эритроцитов, использование реагентов с истекшим сроком годности; сокращение времени наблюдения за реакцией; нарушение температурного режима окружающей среды).
Ошибки, связанные с аномальными свойствами тестируемых эритроцитов, слабые формы антигена А (чаще).
Ошибки, связанные с аномальными свойствами исследуемой сыворотки: стандартные эритроциты в присутствии исследуемой сыворотки образуют монетные столбики, что может быть принято за положительный результат. Добавление 1-2 капель физраствора в пробирку и мягкое покачивание обычно разрушает монетные столбики, но не истинные агглютинаты.
Слайд 31 ПРАВИЛА, КОТОРЫЕ НАДО СОБЛЮДАТЬ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ГРУППЫ КРОВИ:
использовать для
исследования реактивы, в качестве которых нет сомнения;
определение групповой принадлежности производить перекрестным методом;
применять только стандартные эритроциты, цоликлоны;
использовать моноклональный реагент АВ для контроля специфичности реакции агглютинации;
кровь для исследования брать до проведения больному гемотрансфузий;
кровь для исследования брать до переливания плазмозамещающих растворов ( для исключения ошибок, вызванных склеиванием эритроцитов в монетные столбики);
обращать внимание на диагноз.
Слайд 32СИСТЕМА АНТИГЕНОВ РЕЗУС
Это одна из наиболее полиморфных антигенных систем эритроцитов человека.
В состав ее входит около 50 различных антигенов, которые содержатся только в эритроцитах человека и некоторых видов высших обезьян.
Располагаются они на мембране эритроцита и являются ее структурными белками. Данный вид полипептидов несет резус-специфичность, являясь сильными иммуногенами.
Слайд 33Открытию системы послужили наблюдения Ландштейнера и его ученика Винера, что сыворотки
морских свинок и кроликов после иммунизации эритроцитами обезьян Macacus Rhesus агглютинируют не только эритроциты макак, но и эритроциты людей.
Этот антиген, определяемый у 85% людей белой расы, был назван резус-фактор. Его определение обозначили Rh+, не выявление-Rh-. Антитела соответственно получили название анти-резус.
Открытии резус-фактора явилось крупным достижением в развитии иммуносерологии.
Слайд 34В соответствии с приказом №2 МЗРФ от 09.01.98г « Об утверждении
инструкций по иммуносерологии»
Среди людей выделяют две группы крови по системе резус:
-резус положительная (Rh+) c наличием антигена Д на эритроцитах
-резус отрицательная(Rh-) без него на эритроцитах.
Слайд 35ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ
РАЗНОВИДНОСТЬ АНТИГЕНА D
НОРМАЛЬНО ВЫРАЖЕННЫЙ D:
на эритроцитах присутствуют все
эпитопы (большинство индивидов)
D СЛАБЫЙ:
сниженное количество антигенных детерминант
D ВАРИАНТНЫЙ:
количество антигенных детерминант не снижено, но они отличаются
Слайд 36Определение резус–принадлежности при помощи цоликлона анти-D Супер
ОСНАЩЕНИЕ:
моноклональные антитела анти-D супер (IgM);
смачиваемая
пластинка;
раствор натрия хлорида 0,9%;
стеклянные или пластмассовые палочки.
ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ:
Нанести по 1 большой капле (около 0,1 мл) каждого реагента на пластинку;
Нанести по 1 маленькой капле ( около 0,03 мл) исследуемой крови (эритроцитов) рядом с каждым реагентом;
Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю крови (эритроцитов) с соответствующим реагентом;
Покачивать пластинку, результат реакции учитывать через 3 мин после окончания смешивания.
Результат трактуется как положительный при наличии агглютинации, как отрицательный при отсутствии агглютинации.
Слайд 37Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом
в виде крупных агрегатов. Кровь относится к Rh0(D)+(полож.)
При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается. Кровь Rh0(D)-(отр.)
Слайд 38Нормативная документация:
"Требования к проведению иммуногематологических исследований эритроцитов доноров и реципиентов на
СПК и в ЛПУ. Методические указания N 2001/109"
(утв. Минздравом РФ 11.04.2002)
Приказ Министерства Здравоохранения РФ от 9 января 1998 года № 2 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии»
3. Приказ Министерства Здравоохранения РФ от 02 апреля 2013 года № 183н «Об утверждении правил клинического исследования доноров крови и (или) ее компонентов»