Слайд 1Практическое занятие
по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований
«ХИМИЯ УГЛЕВОДОВ»
Слайд 2ОБНАРУЖЕНИЕ УГЛЕВОДОВ
Качественные реакции на углеводы позволяют определить их присутствие в различных
биологических жидкостях и провести дифференциацию моно-, ди- и полисахаридов. В клинической лабораторной практике этими реакциями пользуются для обнаружения в моче лактозы, мальтозы и пентоз, что имеет диагностическое значение.
Слайд 3Реакция №1
«Проба Биаля
(обнаружение пентоз)»
Принцип: пентозы с орцином
и треххлористым железом в кислой среде образуют при нагревании соединение желто-зеленого цвета.
Слайд 4Реактивы :
1) орцин (5-метилорцин);
2) концентрированная хлористоводородная кислота; 3) треххлористое
железо FeCI3 x 6H2O, 10% раствор;
4) реактив Биаля (1 г орцина растворяют в 500 мл хлористоводородной кислоты и добавляют 1 мл 10% раствора треххлористого железа);
5) моча;
Слайд 5Берут пробирку, подписывают и наливают 5 мл
реактива Биаля
Слайд 7Пробирку нагревают до кипения
Слайд 8При положительной реакции появляется желто-зеленое окрашивание. В моче здорового человека пентозы
не обнаруживаются (отрицательный результат)
Слайд 9Реакция №2
«Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
Принцип: лактоза
и мальтоза с аммиаком в щелочной среде образуют при нагревании окрашенные соединения.
Слайд 10Реактивы :
1) аммиак водный, концентрированный;
2) гидроокись калия, 20% раствор;
3) 1% раствор лактозы;
4) 1% раствор мальтозы;
5) моча.
Слайд 12В 1-ю пробирку добавляют 5 мл мочи
Слайд 13Во 2-ю пробирку добавляют 5 мл раствора
лактозы (1% раствор)
Слайд 14В 3-ю пробирку добавляют 5 мл раствора
мальтозы (1% раствор)
Слайд 15Во все три пробирки прибавляют 2,5 мл раствора аммиака
Слайд 16Затем во все 3 пробирки добавляем 200 мкл (0,2 мл) раствора
КОН (20% раствор)
Слайд 17Пробирки нагревают на водяной бани 30 минут при 600С
Слайд 18При наличие лактозы появляется коричневая окраска (пробирка №2)
Слайд 19При наличие мальтозы появляется красная окраска (пробирка №3)
Слайд 20В моче здорового человека мальтоза и лактоза не обнаруживается (пробирка №1)
Слайд 21Реакция №3
«Проба Селиванова
(обнаружение фруктозы»
Принцип: при нагревании фруктозы с резорцином в кислой среде образуются соединения, окрашенные в красный цвет.
Слайд 22Реактивы :
1) HCl, 1 моль/л;
2) резорцин (5 г в
1 моль/л раствора HCl);
3) моча;
4) 1% раствор фруктозы.
Слайд 25Во 2-ю пробирку вносят 2 мл раствора фруктозы (1% раствор)
Слайд 26После чего в каждую пробирку приливают по 1 мл раствора резорцина
Слайд 28При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание
(пробирка №2)
Слайд 29В норме окраска не появляется (пробирка №1)
Слайд 30
Оценку пробы проводят в момент закипания, так как при длительном кипячении
окраска может появиться при наличии глюкозы (при небольшой концентрации глюкозы образуется красно-бурый осадок). Пищевая нагрузка медом и фруктами может дать положительную пробу.
Слайд 31Реакция №4
«Обнаружение крахмала»
Принцип: крахмал с йодом образует окрашенное
соединение синего цвета.
Слайд 32Реактивы :
1) 1% раствор крахмала;
2) йод, 1% раствор в
2% растворе йодида калия.
Слайд 34Добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)
Слайд 35Затем добавляют 1-2 капли раствора йода
Слайд 36При положительной реакции на йод появляется ярко-синее окрашивание
Слайд 37СВОЙСТВА УГЛЕВОДОВ
Моносахариды и некоторые дисахариды, имеющие свободную карбонильную группу, обладают способностью
восстанавливать в щелочной среде металлы из окислов в закисные формы или свободное состояние. Этим свойством пользуются в практике для обнаружения глюкозы в крови и моче.
Слайд 38Реакция №5
«Реакция Троммера»
Принцип: глюкоза в щелочной среде восстанавливает
окись меди в закись, при этом сама окисляется до глюконовой кислоты.
Слайд 39Реактивы :
1) глюкоза, 1% раствор;
2) мальтоза, 1% раствор;
3)
сахароза, 1% раствор;
4) крахмал, 1% раствор;
5) гидроокись натрия, 10% раствор;
6) сульфат меди, 5% раствор.
Слайд 41В 1-ю пробирку добавляют 10 капель
раствора глюкозы (1% раствор)
Слайд 42Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель
раствора мальтозы (1% раствор)
Слайд 43В 3ю пробирку добавляют 10 капель
раствора сахарозы (1% раствор)
Слайд 44В 4-ю пробирку добавляют 10 капель
раствора крахмала (1% раствор)
Слайд 45После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель гидроокиси натрия
(NaOH 10% раствор)
Слайд 46Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли сульфата меди (CuSO4
5% раствор)
Слайд 47Каждую пробирку осторожно нагревают до кипения
Слайд 48В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба
положительная выпадает осадок кирпично-красного цвета (закись меди)
Слайд 49В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная
(изменения цвета не происходит)
Слайд 50Реакция №6
«Реакция Ниландера»
Принцип: Глюкоза, окисляясь, восстанавливает висмут до
гидрата закиси или свободного состояния.
Слайд 51Реактивы :
1) глюкоза, 1% раствор;
2) мальтоза, 1% раствор;
3)
сахароза, 1% раствор;
4) крахмал, 1% раствор;
5) реактив Ниландера (в фарфоровой ступке смешивают 2 г нитрата висмута и 4 г сигнетовой соли. При тщательном растирании добавляют небольшими пропорциями 10 мл 10% раствора гидроокиси натрия. Фильтруют, хранят в склянке тёмного стекла на холоде).
Слайд 53В 1-ю пробирку добавляют 10 капель
раствора глюкозы (1% раствор)
Слайд 54Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель
раствора мальтозы (1% раствор)
Слайд 55В 3ю пробирку добавляют 10 капель
раствора сахарозы (1% раствор)
Слайд 56В 4-ю пробирку добавляют 10 капель
раствора крахмала (1% раствор)
Слайд 57После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель реактива Ниландера
Слайд 58Каждую пробирку осторожно кипятят 2 минуты
Слайд 59В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба
положительная появляется темно-коричневое окрашивание
Слайд 60В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная
(изменения цвета не происходит)
Слайд 61Надеемся, что наша инструкция поможет вам не сделать ошибок в практической
работе.
Желаем удачи!
Слайд 62Составитель: Кузнецова Т.Н. – преподаватель дисциплины «Основы биохимии с методами клинико-биохимических
исследований»
Москва
2008 год