Слайд 1Общая вирусология. Бактериофаги
Слайд 2План лекции
Морфология вирусов. Особенности классификации.
Взаимодействие вируса с клеткой: продуктивный тип и
интегративный тип
Культивирование и индикация вирусов
Бактериофаги
Слайд 3Морфология вирусов, особенности классификации
Наука о вирусах (син. вирусные частицы, вирионы, вироспоры).
«Вирус» – яд (с лат.)
Вирусы относятся к царству Vira.
Слайд 4История открытия вирусов
Санкт-Петербургский императорский университет
Дмитрий Иосифович Ивановский
Слайд 5Главные отличия вирусов от других микроорганизмов
неклеточное строение
отсутствие транскрипционно-трансляционного комплекса
у вирусов
нет органелл, ответственных за получение энергии
всегда только один тип нуклеиновой кислоты: РНК или ДНК.
неинтегральный способ репродукции
Слайд 6Вирусы существуют в 2 формах
Вирион – это внеклеточная покоящаяся инфекционная форма;
Вирус
– это внутриклеточная репродукционная форма.
Слайд 7Размеры вирусов
Находятся за пределами разрешающей способности светового микроскопа
Световые лучи огибают
эти мелкие частицы, т.к. разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм.
Слайд 8сем. Picornaviridae
род Aphthovirus
Один из мелких вирусов - вирус ящура Ø
~ 27 нм
Слайд 9сем. Poxviridae
Самый крупный – вирус натуральной оспы Ø 300-450нм
Слайд 11Разнообразная форма вирусов
ШАРОВИДНАЯ форма вирусов полиомиелита и ВИЧ
Форма сперматозоида бактериофагов
Слайд 12Способы хранения генетической информации
1. 2Н ДНК (сем.Adenoviridae)
2. 1Н ДНК (сем. Parvoviridae)
3.
2Н РНК (сем. Reoviridae)
4. 1Н +РНК (sense РНК) (сем. Picornaviridae, Retroviridae).
5. 1Н –РНК (antisense РНК) (сем. Orthomyxoviridae род Influenzаvirus)
6. Двусмысловая + и -РНК (ambisense РНК)
Слайд 14Структура вирусов
Целым вирус бывает только в покоящемся состоянии.
Вирус состоит из: белковой
оболочки – капсида.
Капсид образован белками – капсомерами.
Внутри капсида находится НК.
белковый капсид + НК = нуклеокапсид.
Слайд 16Форма белкового капсида определяет форму симметрии
1. икосаэдрическая симметрия (12 вершин, 20
граней, 30 ребер).
голые – только капсид (например:
сем. Picornaviridae)
одетые – окружены мембраной
сем. Retroviridae.
2. спиральная симметрия –
сем. Filaviridae.
3. несимметричные (р. Lyssovirus – вирус бешенства)
Слайд 17Капсомеры
Спиральный тип симметрии: капсомеры располагаются по спирали. Такие вирусы крупные, полиморфны.
Имеют палочковидную и пулевидную форму.
Слайд 18Кубический тип симметрии: капсомеры образуют многогранник, ограниченный определенным количеством равносторонних треугольников.
Могут быть в виде тетраэдра (4), октаэдра (8), икосаэдра (20). Такие вирусы имеют сферическую форму.
1.Капсомеры
2.Нуклеиновая кислота
Слайд 19Строение вирусов
Капсид и суперкапсид защищают вирионы от влияния окружающей среды, обусловливают
избирательное взаимодействие (адсорбцию) с клетками, определяют антигенные и иммуногенные свойства вирионов.
Вирус ВИЧ
Слайд 20Систематика вирусов
Царство вирусов разделено на семейства.
Названия сем. заканчиваются на: – viridae
сем. Picornaviridae
сем. Rhabdoviridae
Для вирусов человека и животных внутри семейства существует деление на рода.
Родовое название заканчивается: – virus
род Influenzаvirus – вирус гриппа
род Aphthovirus – вирус ящура
Слайд 21В основу классификации вирусов положены следующие категории:
тип нуклеиновой кислоты (ДНК или
РНК), ее структура, количество нитей (одна или две),
особенности воспроизводства вирусного генома;
размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
наличие суперкапсида;
чувствительность к эфиру и дезоксихолату;
место размножения в клетке;
антигенные свойства и др.
Слайд 22Классификация вирусов
Вирусы приспособлены к существованию в любых живых организмах.
Их обнаружили
у
Прокариот (археев и бактерий)
Растений, водорослей, грибов
Животных и человека
Вирусы взаимодействуют с живыми организмами на разных уровнях:
Клетка
Орган
Организм
Популяция
Слайд 23Взаимодействие вирионов с клеткой
продуктивный тип, завершающийся образованием вирусного потомства;
абортивный тип,
не завершающийся образованием новых вирусных частиц, поскольку инфекционный процесс прерывается на одном из этапов;
интегративный тип, или вирогения, характеризующийся встраиванием вирусной ДНК в хромосому клетки-хозяина.
Слайд 24Этапы продуктивного типа взаимодействия
1.адсорбция вируса на клетке;
2. проникновение вируса в
клетку; 3.«раздевание» вируса;
4. биосинтез вирусных компонентов в клетке;
5. формирование вирусов;
6. выход вирусов из клетки
Слайд 25Адсорбция
Это специф. процесс. Вирус адсорбируется на определенных участках клеточной мембраны –
рецепторах. Клеточные рецепторы могут иметь разную химическую природу - белки, углеводные компоненты белков и липидов, липиды. Число специф.рецепторов на поверхности 1 клетки колеблется до 105. Т.о. на клетке могут адсорбироваться сотни вирусных частиц. Поверхностные структуры вируса, «узнающие» специфические клеточные рецепторы и взаимодействующие с ними, называются прикрепительными белками. Обычно эту функцию выполняет один из поверхностных белков капсида или суперкапсида. Соответствие клеточных рецепторов вирусным прикрепительным белкам имеет значение для возникновения инфекционного процесса в клетке.
Способность вирусов избирательно поражать определенные клетки органов и тканей организма называют тропизмом.
Слайд 26Проникновение вируса в клетку
Существует 2 способа проникновения вирусов в клетку: виропексис
и слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной. При виропексисе происходят «впячивание» участка клеточной мембраны и образование внутриклеточной вакуоли, которая содержит вирусную частицу. Вакуоль с вирусом может транспортироваться в любом направлении в разные участки цитоплазмы или ядро клетки. Процесс слияния осуществляется одним из поверхностных вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочки.
Слайд 27Раздевание
Заключается в удалении защитных вирусных оболочек и освобождении внутреннего компонента вируса,
способного вызвать инфекционный процесс. Происходит постепенно, в несколько этапов, в определенных участках цитоплазмы или ядра клетки, для чего клетка использует набор специальных ферментов. В случае проникновения вируса путем слияния вирусной оболочки с клеточной мембраной процесс проникновения вируса в клетку сочетается с первым этапом его «раздевания». Конечными продуктами «раздевания» являются сердцевина, нуклеокапсид или НК вируса.
Слайд 28Биосинтез компонентов вируса
Проникшая в клетку вирусная НК несет генетическую информацию, которая
конкурирует с генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клетки, подавляет собственный метаболизм и заставляет ее синтезировать новые вирусные белки и НК, идущие на построение вирусного потомства.
Реализация генетической информации вируса осуществляется в соответствии с процессами транскрипции, т.е. синтез иРНК, комплементарных матричным ДНК или РНК), трансляции (т. е. синтез белков на рибосомах клетки с участием иРНК) и репликации (т. е. синтез молекул НК, гомологичных геному). Так как генетический аппарат вирусов разнообразен, передача наследственной информации в отношении синтеза иРНК различна.
Слайд 29Основные схемы реализации вирусной генетической информации могут быть представлены следующим образом
1.для
ДНК-содержащих вирусов: ДНК вируса->иРНК->белок вируса;
2.для РНК-содержащих минус-нитевых вирусов: РНК вируса->иРНК-белок вируса;
3.для РНК-содержащих плюс-нитевых вирусов: РНК вируса->белок вируса;
4.для РНК-содержащих ретровирусов: РНК вируса - комплементарная ДНК->иРНК->белок вируса.
Вирусная НК кодирует синтез двух классов белков: неструктурных белков-ферментов, которые обслуживают процесс репродукции вирусов на разных его этапах, и структурных белков, которые войдут в состав вирусных частиц потомства. Синтез компонентов вируса (белков и нуклеиновых кислот) разобщен во времени и пространстве, т. е. протекает в разных структурах ядра и цитоплазмы клетки. Поэтому этот способ размножения вирусов называется дисъюнктивным.
Слайд 30Сборка вирусов
Синтезированные вирусные НК и белки обладают способностью «узнавать» друг друга
и самопроизвольно соединяются в результате гидрофобных, солевых и водородных связей.
Существуют принципы сборки вирусов, имеющих разную структуру:
1.формирование вирусов является ступенчатым процессом с образованием промежуточных форм;
2.сборка просто устроенных вирусов заключается во взаимодействии молекул вирусных НК с капсидными белками и образовании нуклеокапсидов (например, вирусы полиомиелита). У сложно устроенных вирусов сначала формируются нуклеокапсиды, с которыми взаимодействуют белки суперкапсидных оболочек (например, вирусы гриппа);
3.формирование вирусов происходит на ядерных или цитоплазматических мембранах клетки;
4.сложные вирусы в процессе сборки включают в свой состав компоненты клетки-хозяина (липиды, углеводы).
Слайд 31Выход вирусов из клетки
Различают 2 типа выхода вирусного потомства из клетки.
1 тип – взрывной – характеризуется одновременным выходом большого количества вирусов. При этом клетка быстро погибает. Такой способ выхода характерен для простых вирусов. 2 тип – почкование. Он присущ сложным вирусам . На заключительном этапе сборки нуклеокапсиды сложных вирусов фиксируются на клеточной мембране, модифицированной вирусными белками, и постепенно выпячивают ее. В результате образуется «почка», содержащая нуклеокапсид. Затем «почка» отделяется от клеткиТ.о. внешняя оболочка этих вирусов формируется в процессе их выхода из клетки. При таком механизме клетка может продолжительное время продуцировать вирус, сохраняя в той или иной мере свои основные функции. Время, необходимое для осуществления полного цикла репродукции вирусов, варьирует от 5-6 ч (вирусы гриппа, натуральной оспы и др.) до нескольких суток (вирусы кори, аденовирусы и др.). Образовавшиеся вирусы способны инфицировать новые клетки и проходить в них указанный выше цикл репродукции.
Слайд 32Вирогения
Вирогения - встраивание НК вируса в хромосому клетки. Вирусный геном реплицируется
и функционирует как составная часть клеточного генома.
Интеграция вирусного генетического материала с ДНК клетки характерна для опред. групп вирусов: бактериофагов, онковирусов, нек. инфекц.вирусов (вирус гепатита В, аденовирус, ВИЧ). Для интеграции с хромосомой клетки необходима кольцевая форма 2Н вирусной ДНК. У ДНК-содержащих вирусов (вирус гепатита В) их ДНК обладает свойством встраиваться в геном клетки при участии ферментов. У нек. РНК-содержащих вирусов (ВИЧ, онкогенные вирусы) процесс интеграции более сложный и является обязательным в цикле их репродукции. У этих вирусов сначала на матрице РНК с помощью вирусспецифического фермента обратной транскриптазы (ревертазы) синтезируется ДНК-копия (кДНК), которая затем встраивается в ДНК клетки. ДНК вируса, находящаяся в составе хромосомы клетки, называется ДНК-провирусом. При делении клетки, сохраняющей свои нормальные функции, ДНК-провирус переходит в геном дочерних клеток, т.е. состояние вирогении наследуется. ДНК-провирус несет дополнительную генетическую информацию, в результате чего клетки приобретают новые свойства. Так, интеграция может явиться причиной возникновения ряда аутоиммунных и хронических заболеваний, опухолей. Под воздействием физ. и хим.факторов ДНК-провирус может исключаться из клеточной хромосомы и переходить в автономное состояние, что ведет к репродукции вируса.
Слайд 33Культивирование и индикация вирусов
Слайд 34Культивирование и индикация вирусов
Слайд 35Культивирование и индикация вирусов
Слайд 36Классификация культур клеток
По технике приготовления:
Однослойные, способные прикрепляться и размножаться на поверхности
стекла лабораторной посуды
Суспензированные , размножающиеся во всем объеме питательной среды
Органные, представленные цельными кусочками органов, сохраняющих структуру вне организма
2. По числу жизнеспособных генерации:
Первичные, способные размножаться в первых генерациях
Перевиваемые (стабильные), способные размножаться неопределенно долго
Полуперевиваемые, с ограниченной жизнью 40-50 пассажами
Слайд 37Индикация вирусов
1. цитопатическое действие
2. образование в клетках включений;
3. образование бляшек;
4. феномен гемадсорбции
5. «цветная» проба.
Слайд 38Бактериофаги - вирусы бактерий, способные специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться
и вызывать их лизис.
История открытия бактериофагов связана с именем канадского исследователя Ф. Д’Эрелля (1917)
Фаги различаются по форме, структурной организации, типу нуклеиновой кислоты и характеру взаимодействия с микробной клеткой.
Фаги состоят из двух основных химических компонентов – нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и белка.
Слайд 39Бактериофаги
По механизму взаимодействия с клеткой выделяют:
Вирулентные (реплицируются в клетке, вызывая её
гибель);
Умеренные (взаимодействуют с клеткой по интегративному типу). Могут быть дефектными, т.е., не способны давать фаговое потомство.
По специфичности действия различают:
поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий,
моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида,
типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий.
Слайд 40Применение фагов
Фаги используют в диагностике инфекционных болезней - с помощью известных
(диагностических) фагов проводят идентификацию выделенных культур микроорганизмов. В силу высокой специфичности фагов можно определить вид возбудителя или варианты (типы) внутри вида. Фаготипирование имеет большое эпидемиологическое значение, т.к. позволяет установить источник и пути распространения инфекции;
с помощью тест-культуры можно определить неизвестный фаг в исследуемом материале, что указывает на присутствие в нем соответствующих возбудителей.
Фаги применяют для лечения и профилактики инфекционных болезней. Производят брюшнотифозный, дизентерийный, синегнойный, стафилококковый фаги и комбинированные препараты. Способы введения в организм: местно, энтерально или парентерально.
Умеренные фаги используют в генетической инженерии и биотехнологии в качестве векторов для получения рекомбинантных ДНК.