Методы выделения и количественного определения основных БАВ лекарственного сырья презентация

в лекарственном растениеводстве»
Проф. Е.Л. Маланкина

применяемых в хроматографии подвижных и неподвижных фаз.  В данной классификации все виды подразделяются на 3 основных вида по агрегатному состоянию используемой подвижной фазы:
газовая (ГХ, GH),
жидкостная (ЖХ, LH)
сверхкритическая флюидная хроматография (подвижная фаза - полярный газ (СО2, NH3 и т.д.) сжатый до жидкого состояния) - что совершенно естественно, т.к. именно подвижная фаза растворяя в себе пробу  определяет спектр разделяемых и анализируемых веществ.

фаза (ПФ) движется в пористой среде слоя адсорбента.

Хроматограмма чернил

слое (толщина 0,1-0,5 мм) сорбента при их движении в потоке подвижной фазы (элюента). Последняя представляет собой, как правило, жидкость, однако осуществлен и газовый вариант ТСХ.

бумажной хроматографии,
возможность выбора одной из неподвижных фаз, обладающих наиболее подходящими свойствами.

году хроматографическое исследование на плоской горизонтальной пластинке, на которую нанесли раствор.
Но активный интерес возник в 50-х годах.
Появились различные сорбенты, понятие о системах растворителей.

мелкозернистые силикагель, Аl2О3, целлюлозу, крахмал, полиамид, иониты и др. Суспензиями этих сорбентов покрывают пластинки из стекла, фольги или пластика;
для закрепления слоя применяют крахмал, гипс или др. связующие. Промышленность выпускает готовые пластинки с уже закрепленным слоем сорбента.

стеклянной, металлической или пластиковой основе. В ряде случаев к сорбенту добавляется флуоресцентный индикатор синего или зелёного цвета.
Также существуют NH2-, CN-, ДИОЛ, и RP модифицированные сорбенты для анализа веществ не разделяющихся на силикагелях напрямую.
Разделение, как правило, производится в специальных герметичных камерах для ТСХ.

кислот, солей, комплексообразующих и др. в-в.

неподвижной фаз) в разделении веществ основную роль могут играть процессы адсорбции, экстракции, ионного обмена, комплексообразования. На практике часто реализуются одновременно несколько механизмов разделения.

ТСХ
Горизонтальную ТСХ

в т. ч. близких по свойствам ионов благородных металлов, а также полимеров, лек. средств, пестицидов, аминокислот, липидов, алкалоидов и т. д.
С помощью ТСХ удобно анализировать микрообъекты (малые количества веществ), оценивать чистоту препаратов, контролировать технологические процессы и состав сточных вод, изучать поведение различных ионных форм элементов, предварительно подбирать условия для колоночной хроматографии.

фазой служит инертный газ (газ-носитель), протекающий через неподвижную фазу с большой поверхностью. В качестве подвижной фазы используют водород, гелий, азот, аргон, углекислый газ. Газ-носитель не реагирует с неподвижной фазой и разделяемыми веществами.
Различают газо-твёрдофазную и газо-жидкостную хроматографию. В первом случае неподвижной фазой является твёрдый носитель (силикагель, уголь, оксид алюминия), во втором — жидкость, нанесённая на поверхность инертного носителя.
Разделение основано на различиях в летучести и растворимости (или адсорбируемости) компонентов разделяемой смеси.

расхода газа носителя  3 — устройство ввода пробы  4 — хроматографическая колонка в термостате  5 — детектор  6 — электронный усилитель  7 — регистрирующий прибор (самописец, компьютер)  8 — расходомер

в системе, а также поддержка необходимого давления газа на входе в систему. Обычно в качестве регулятора расхода газа используются редуктор или дроссель.
Устройство ввода пробы
Предназначено для подачи пробы анализируемой смеси в хроматографическую колонку.
В том случае, если хроматограф предназначен для анализа жидких проб, устройство ввода проб совмещается с испарителем.
Проба вводится в испаритель при помощи микрошприца путём прокалывания эластичной прокладки. Испаритель обычно нагрет до температуры, превышающей температуру самой колонки на 50 °C. Объём вводимой пробы — несколько микролитров

газовой хроматографии обычно используют U-образные или спиральные колонки. Внутренний диаметр колонок — 2-15 мм, а длина — 1-20 м. Материалом для изготовления колонок служит стекло, нержавеющая сталь, медь, иногда фторопласт. В последнее время наибольшее распространение получили капиллярные колонки изготовленные из плавленного кварца, с нанесенной внутри неподвижной фазой. Длина подобных колонок может достигать сотен и даже тысяч метров, хотя чаще используются колонки длиной 30-50 м.
Крайне важно плотное наполнение колонок неподвижной фазой, а также обеспечение постоянства температуры колонки в течение всего процесса хроматографирования. Точность поддержания температуры должна составлять 0,05-1 °C. Для точного регулирования и поддержания температуры используют термостаты.

колонки. Принцип действия детектора должен быть основан на измерении такого свойства аналитического компонента, которым не обладает подвижная фаза.
В газовой хроматографии используют следующие виды детекторов:
пламенно-ионизационный детектор
детектор по теплопроводности (катарометр)
детектор электронного захвата
пламенно-фотометрический детектор
термоионный детектор
фотоионизационный детектор
масс-спектрометр
ИК-фурье спектрометр

в равновесном распределении их между двумя несмешивающимися фазами, одна из которых неподвижна, а другая подвижна (элюент).

адсорбционную, распределительную, ионообменную, эксклюзионную, лигандообменную и другие.

нефтехимия, биология, биотехнология, медицина, пищевая промышленность, охрана окружающей среды, производство лекарственных препаратов и во многих других.
Определение остаточных пестицидов. Флавоноидов, витаминов, алкалоидов и др

зарядов разделяемых молекул.
Данный вид хроматографии позволяет разделить практически любые заряженные молекулы, в том числе: крупные — белки, малые—молекулы нуклеотидов и аминокислот. Часто ионообменную хроматографию используют как первый этап очистки белков.
Для проведения ионообменной хроматографии применяют синтетические полимеры, чаще всего на основе полистирола и полифенолов.
Выпускаемые промышленностью ионообменные смолы имеют вид небольших полимерных шариков, которые перед использованием нужно замачивать в воде или другом элюенте.
Набухание ионообменной смолы сопровождается увеличением доступности функциональных групп полимера за счет раздвигания макромолекул молекулами элюента, как при пластификации полимера. Степень набухания ионообменной смолы регулируют как длиной макромолекул, так и степенью поперечной сшивки полимерной матрицы.

на определении отношения массы к заряду ионов, образующихся при ионизации представляющих интерес компонентов пробы. Один из мощнейших способов качественной идентификации веществ, допускающий также и количественное определение.

Там начинается второй этап масс- спектрометрического анализа — сортировка ионов по массам (точнее по отношению массы к заряду, или m/z). Существуют следующие типы масс-анализаторов:
непрерывные масс-анализаторы
Магнитный и электростатический секторный масс-анализатор (англ. Sector instrument)
Квадрупольный масс-анализатор (англ. Quadrupole mass analyzer)
импульсные масс-анализаторы
Времяпролётный масс-анализатор (англ. Time-of-flight mass spectrometry)
Ионная ловушка (англ. Ion trap)
Квадрупольная линейная ловушка (англ. Quadrupole ion trap)
Масс-анализатор ионно-циклотронного резонанса с Фурье-преобразованием (англ. Fourier transform ion cyclotron resonance)
Орбитрэп (англ. Orbitrap)