Хроматин, гетерохроматин, упаковка генома презентация

Содержание

Seminars in Cell & Developmental Biology 18 (2007)

Слайд 1ХРОМАТИН. ГЕТЕРОХРОМАТИН. УПАКОВКА ГЕНОМА.

Наука это род человеческой деятельности
по поиску порядка

в природе

Слайд 2Seminars in
Cell & Developmental Biology 18 (2007)


Слайд 5Уровни упаковки генома
Двойная спираль
10 нм фибрилла
30 нм фибрилла
Петельные домены
Фрагмент
конденсированной
хромосомы
Метафазная
хромосома
2 нм 1х
10

нм 6х

30 нм фибрилла 40х

Петельные домены 700х


Интерфаза

?

Из статьи: 
Controlling the double helix
Gary Felsenfeld and Mark Groudine
Nature 421, 448-453


Слайд 6Нуклеонема (10 нм)
15’ 12’ 9’ 6’
MN
Olins&Olins (1974)
vanHolde

(1974)

Noll (1974)


Слайд 7Нуклеонема (10 нм)
146 пн – нуклеосома, 166 п.н. – нуклеосома+Н1, 200

п.н. – нуклеосома+Н1+линкер

Слайд 8Фазирование нуклеосом
Фиксированное расположение нуклеосом
Вирус MMTV,
Участок начала репликации SV40,
βmayor-глобиновый

ген мыши,
альфоидная ДНК АЗМ

Возникает
при наличии в определенном районе генома барьера для распространения нуклеосом (напр. места связывания белковых факторов)
При наличии последовательности, на которой нуклеосома располагается с большим предпочтением (напр. Изогнутые, на которых фазированно расположены каждые 10 пар блоки из 2-3 АТ)


Слайд 9Гистоны
Основные типы H1 (H5 у птиц), H2A, H2B, H3, H4
Обогащены

лизином и аргинином, преимущественно на C и N-концах (хвостах)
Сходная вторичная структура


Слайд 10Вариантные формы гистонов H1, H2A, H2B, H3
Кодируются отдельным однокопийным геном (кроме H3.3)
CENP-A

(CiD дрозофилы, CSE4 дрожжей) = СenH3
H3.3 – вариант транкрипционно активного хроматина
H3.lt – вариант специфичный для семенников
hTSH2b, H2BFWT – формы H2B. Известны только в сперматозоидах
macroH2A – гистон неактивной X-хромосомы. 57% негомологично ни одному из гистонов
H2ABbd – компонент активного хроматина
H2A.Z – компонент активного хроматина
H2A.X – в местах репарации ДНК

Слайд 11Модификации гистонов
Меняют заряд гистонового хвоста
Привлекают специфичные белки


Слайд 12«Гистоновый код»
Совокупность сигналов, экспонированных на поверхности нуклеосом (включая как присутсвие вариантов

гистонов, так и наличие модификаций основных и вариантных их форм)

Слайд 13Гистоновый код
Genome-Wide Views of Chromatin Structure
Oliver J. Rando and Howard Y.

Chang
2009

Слайд 14Histone 3 barcode (Hake, Allis; 2006)


Слайд 15Фибрилла 30 нм
Зиг-заг

Соленоид

Слайд 16Роль H1 и хвостов октамерных гистонов в образовании 30-нм фибриллы
Изменения структуры

30 нм фибриллы при взаимодействии с белками

Слайд 17АТФ-зависимые комплексы ремоделирования хроматина
Перемещение нуклеосом вдоль молекулы ДНК и размещение нуклеосом

на равном расстоянии друг от друга
Частичная декомпактизация нуклеосом, сопряженная с изменением спектра контактов ДНК и гистонов
Перемещение нуклеосомных глобул с одной молекулы ДНК на другую
Замена канонических гистонов на вариантные

Решают проблемы, связанные с нуклеосомной организацией


Слайд 18Принципы работы
Основные 4 группы
SWI\SNF
ISWI
CHD
INO80


Слайд 19Высшие уровни упаковки хроматина
Соленоид?
Латеральное взаимодействие соседних фибрилл?
Радиально-петлевая модель ?


Слайд 20Радиально-петлевая модель
Двойная спираль
10 нм фибрилла
30 нм фибрилла
Петельные домены
Фрагмент
конденсированной
хромосомы
Метафазная
хромосома
2 нм 1х
10 нм


30 нм фибрилла 40х

Петельные домены 700х


Интерфаза

?


Слайд 21Доменная гипотеза организации эукариотического генома
Весь геном построен из однотипных блоков -

доменов, которые
могут включать один или несколько генов

Домены в целом находятся под контролем особых регуляторных
систем, которые контролируют их транскрипционный статус на уровне
упаковки (более компактной или менее компактной) всего домена в
интерфазной хромосоме

Активный домен

Неактивный домен


Слайд 22Хромосомы типа ламповых щеток


Слайд 23Хромосомный скэффолд


Слайд 241947. Mirsky, Ris. Фракция остаточных белков при солевой экстракции хромосом
1948. Zbarsky,

Debov. сообщили о существовании в ядре фракции белков, не экстрагируемых растворами солей высокой концентрации (2 М NaCl).
1962. Zbarsky et al, 1962; Georgiev and Chentsov, 1962 - препараты ядер, обработанные сходным образом, сохраняют очертания ядра и в них выявляются четко различимые остаточное ядрышко и участки гетерохроматина
1974. . Berezney and Coffey опубликовали статью о биохимическом получении фракции остаточных белков и предложили термин “ядерный матрикс”.

Слайд 25ЯМ – это….
Компоненты ЯМ
ламина,
внутренний матрикс
остаточное ядрышко
Остаточная структура клеточного ядра,

сохраняющая архитектурные черты клеточного ядра и включающего ядерную ламину, поровый комплекс, остаточное ядрышко, фиброгранулярную сеть распределенную по всему объему ядра


Слайд 26
Препарат ядерного матрикса
Фиброгранулярная сеть
эдектронноплотные гранулами
Остаточное ядрышко
Ламина (A/C, B)
Поровый
комплекс


Слайд 29Непрерывный клеточный скелет
Figure 1 Transmission electron micrograph (X47,000) of a

portion of nuclear matrix (left) and surrounding cytoplasm. Cytoskeletal filaments are clearly visible. The mouse fibroblast cells were extracted with detergent to remove lipids and further treated with DNase I. In 1895, E. B. Wilson, looking through the light microscope, reported that the nucleus was traversed by fibers that were continuous with those of the cytoplasmic reticulum and that surrounded the chromatin. (From Capco et al., 1982; courtesy of S. Penman.)

Слайд 30ДНК компонент ЯМ


Слайд 32Regulating the mammalian genome: the role of
nuclear architecture
Ronald Berezney (2002)
SAR/MAR consensus

- ?

Слайд 33
Alexey Gavrilov, Sergey V. Razin, and Olga V. Iarovaia
Department of Structural

and functional organisation of chromosomes
Institute of Gene Biology
Moscow

Mapping of the nuclear matrix-bound chromatin hubs
by a new M3C experimental procedure


Слайд 34Метод 3С (chromosome conformation capture)


Слайд 35Presentation and interpretation of 3C data


Слайд 37A model to test M3C approach –
a fragment of chicken chromosome

14 including the α-globin gene domain

Слайд 38



In chicken genome ~170 Kb DNA fragment located downstream to the

alpha-
Globin gene domain is inverted, comparing to a human genome

Слайд 39Matrix 3C (M3C) –
an experimental procedure to analyze the spatial proximity

of nuclear matrix-bound DNA fragments.


The protocol includes:
high salt extraction of nuclei
removal of distal parts of unfolded DNA loops using restriction enzyme treatment
ligation of the nuclear matrix-bound DNA fragments
analysis of ligation frequencies



Слайд 40Comparison “3C” and “M3C” interactions in erythroid cells


Слайд 41Chromatin hub conception
The chromatin hub is a spatial unit of

genes and their regulatory elements

β-globin gene domain
(Tolhuis et al., 2002, Mol Cell)

α-globin gene domain
(Zhou et al., 2006, MCB)

Th2 cytokine gene domain
(Cai et al., 2006,
Nat Genet)


Слайд 43Белки ЯМ


Слайд 44Белки ЯМ


Слайд 45Nuclear
matrins
:
Identification of the major
nuclear matrix proteins
HIROSHI NAKAYASU*
AND

RONALD

BEREZNEYt

PNAS, 1991

Matrin

3 Binds and Stabilizes

mRNA

Salton et al.,

2011

Белки ЯМ (Nakayasu, Berezney, 1991)


Слайд 46The Functional Levels of Higher Order Chromatin
Organization Are Associated With

the Nuclear Matrix

Слайд 471. The nuclear matrix is composed of a major group of

~dozen highly conserved proteins (termed nuclear matrins: PNAS 88, 1991: 10,312) and many other (100’s) less abundant ones including those with cell type, tissue, species, developmental and human tumor (bladder, breast, uterine, cervical, prostate, colon and kidney cancer) specificity.

2. Many of the nuclear matrins are pre-mRNP, RNA splicing or transcriptional factors but many have yet to be identified.

3. Matrin 3 is an ~ 96 kDa protein that contains 2 Zn finger motifs, RNA Recognition Motifs (RRM’s) and an acidic rich domain at the C-T common among transcriptional activators (J Biol Chem 266, 1991: 9893)

Nuclear Matrix Proteins


Слайд 484. Matrin Cyp (cyclophilin) a ~88 kDa protein that contains the

complete cyclophilin protein sequence at the N-T and SR repeats - characteristic of splicing factors – within the carboxyl half. The protein has peptidylprolyl cis-trans isomerase activity and co-localizes with splicing factor-rich nuclear speckles (J. Biol Chem. 273, 1998: 8183)
5. Matrin SRm 160 (~160 kDa protein) is an exon junction splicing factor (Mol. Cell. Biol. 22, 2002: 148).
6. Matrin 250 (~250 kDa) is the hyperphosphorylated form of RNA pol II LS (PNAS 93, 1996: 8253). 7. Matrin SCAF 8 (140 kDa) contains SR-rich motifs and a binding domain specific for hyperphosphorylated CTD of RNA pol II LS (Mol. Cell Biol. 18, 1998, 2406)

Nuclear Matrix Proteins (cont.)


Слайд 49Nuclear Matrix Proteins (cont.)

DNA (Chromatin) Loop Anchoring Proteins
or MAR/SAR Binding Proteins

????

DNA Topoisomerase
SAF-A and SAF-B (Bind both DNA and RNA)
SAT B1 – MAR protein specific for lymphocytes

What else ???? More Research is needed at the levels of DNA (chromatin loops), multi-loop chromatin domains ( ~1 mbp domains) and whole chromosome territories.


Слайд 50Saf-a/hnRNP U
a
b
c
d
Lobov et al., 2000
Lobov et al., 2000


Слайд 51Saf-a/hnRNP U specifically interacts with
β-actin in the nucleus
Actin and hnRNP

U cooperate for productive transcription by RNA Polymerase II
Kukalev A et al., Nature, 2005

Слайд 52Actin binds Saf-a/hnRNP U in vivo
0.5 mM DSP
(dithiobis-
succinimidyl-
propionate)
Nuclear extract
preparation
8M Urea


DNase I
Pull

down

Слайд 53: a hypothesis PNAS, 1985
Principles of Intracellular

Protein Transport:
1999 Nobel Prize


Слайд 54

Vimentin NLS
Reichenzeller et al., 2000


Слайд 56 MA et al., JCB, 1999, Figure 1
Chromosome territories are maintained

after extraction of WI-38 cells for DNA- rich nuclear matrix, but are disrupted when RNase A digestion precedes 2.0 M NaCl extraction

Intact Cell

DNA – rich in situ Nuclear Matrix

RNase A + 2.0M NaCl


Слайд 57 MA et al., JCB, 1999, Figure 2
Relationship of nuclear matrix

structure to chromosome territory disruption in NHF-1 cells

Слайд 58 MA et al., JCB, 1999, Figure 4
Protocol for releasing nuclear

matrix associated proteins that correlates with disruption of chromosome territories

Слайд 59Зависимость структуры ядерного матрикса
от обработки

0.1M
0.35M


Слайд 60MAJOR CONCLUSIONS OF MA et al., 1999
Chromosome territory organization is maintained

after in situ extraction of cells with 2M NaCl for nuclear matrix preparation (Fig 1)

Disruption of nuclear matrix organization by pre-treatment with RNase A before 2M NaCl extraction leads to a corresponding disruption of territorial organization (Fig 1 & 2)

The finding that extraction with ammonium sulfate at similar ionic strength (0.65 M) as 2M NaCl following RNase does not lead to territorial disruption (Fig 2) has led to a procedure to isolate proteins that are released in association with disruption of territories (Fig 4)

These released proteins comprise a distinct subset of proteins in nuclear matrix preparations (Fig 5) and are termed CTAPs (Chromosome Territory Anchoring Proteins)



Слайд 61Hendzel et al (1999) – в интерхроматиновом пространстве не выявляется нуклеопротеиновая

сеть
Pederson (2000) – в ядре нет места для волокон ЯМ
Misteli etal (1997) - Стационарное положение интерхроматиновых доменов объясняется высокой концентрацией белков и нуклеопротеинов в интерхроматиновом пространстве.
Hancock (1999) - Анализ методик получения ЯМ показывает, что каждый из шагов получения ЯМ (инкубация при 37оС, обработка соединениями меди, дийодсалицилатом лития, NaCl или (NH4)2SO4 и т.п.) приводит к образованию артефактных белок-белковых комплексов. Филаментная сеть, наблюдавшаяся первыми исследователями, есть как результат артефактной агрегации.
Tan et al. (2000) - белки рибонуклеопротеиновых комплексов при инкубации их при 37оС и обработке их 2-меркаптоэтанолом и высокими концентрациями солей образуют филаменты 7-10 нм.


Слайд 62
Однако, существование одного из компонентов ядерного матрикса – промежуточнофиламентной ламины in

situ и in vivo не подвергается сомнению (Stuurman et al., 1998; Broers et al., 1999).
Известно, что во внутреннем пространстве ядра располагаются белки, способные к полимеризации в филаментноподобные структуры – ламины, ядерный актин, NuMa, белок порового комплекса Tpr (Moir et al., 1994; Parry, 1994; Hozak et al., 1995; Jagatheesan et al., 1999; Pedersen, 2000).
Показано, что эти белки не принимают участия в формировании внутриядерных филаментов in vivo (Parry, 1994; Moir et al., 1994; Hozak et al., 1995; Nickerson, 1995; Jagatheesan et al., 1999).
Однако обсуждается возможность формирования небольших локальных филаментных сетей (gene expression matrices) в местах активной транскрипции (Pedersen, 2000

Слайд 63Структурные белки цитоплазмы
Поддержание формы клетки
Локомоция
Участие в межклеточных контактах
Регуляторные функции
Опосредование вне-

и внутриклеточных сигналов


Слайд 64Какие функции нужны в ядре?
Поддержание формы клетки
Локомоция
Участие в межклеточных контактах
Регуляторные функции


Опосредование вне- и внутриклеточных сигналов
Отделение ядерного пространства
Контроль за транспортом внутри ядра


Слайд 65Нужен ли ядру скелет?
Chr 6
MHC
CEN


Слайд 66Что нам осталось от концепции ЯМ
1. Петельно-доменная организация генома
Figure 12. Insulator

elements organize the chromatin fiber in the nucleus by establishing separate compartments of higher-order chromatin structure. (A) Domains of open chromatin (yellow nucleosomes) are flanked by insulators (pink, blue and green spheres) that interact together to form a loop. (B) Diagram showing part of a nucleus with compartmentalized chromatin, anchored in part to the nuclear periphery by interactions of the insulators with the nuclear lamina (red lines).

Слайд 67
Schumaker et al., 2003
Что нам осталось от концепции ЯМ?
Ламины и актин

– структурные белки ядра.

Слайд 68
Dahl K N , and Kalinowski A J Cell Sci 2011;124:675-678
©2011

by The Company of Biologists Ltd

Слайд 69
ЯМ – как сеть опорных промежуточных филаментов – неверная гипотеза
НО его

изучение позволило открыть сложную сеть взаимодействующих трансляционных, регуляторных, репликационных и т.д. комплексов и понять механизмы пространственной организации генома
Мы также получили удобный метод для изучения белков, взаимодействующих с определенной фракцией генома – некодирующей ДНК, активно транскрибируемой ДНК и реплицирующейся ДНК

Слайд 70Схема организации высших уровней упаковки хроматина
40% ядерного скаффолда
SC1 = топоизомераза II

(Topo II)
SC2 - Topo I из семейства белков
XCAP C & E

Слайд 71
Петельные домены несомненно есть
Основные белки, участвующие в формировании петель – Топоизомеразы,

РНП-комплексы.
Некоторые из них ассоциированы с локальными скелетными (напр. актиновыми) филаментами

Слайд 72Shaping the Genome with Non-Coding RNAs. Wang et al., Current Genomics,

2011

Слайд 73Модели высших уровней упаковки хроматина


Слайд 75Хромосомные территории
“Вермишель на тарелке” – хроматиновые нити, беспорядочно распределенные по ядру
“Клубки

ниток” – компартментализация ядра: каждая хромосома занимает свою «хромосомную территорию», в которую другие хромосомы не проникают (Bovery, 1888, 1903; T. Cremer)

Слайд 76Первые эксперименты T. Cremer (1983)


Слайд 77Multicolor FISH


Слайд 78Плечи хромосом не перекрываются


Слайд 80Субдоменная организация хромосомной территории (Verschurre et al., 1999)


Слайд 81Активные гены могут быть удалены от основной части ХрТ
Вся ли хромосома

покрыта пробой?
Весь ли сигнал от ХрТ мы видим?
В любом случае, если это все площадь одной хромосомы, то хромосомы должны перекрываться

Слайд 82Сателлитная ДНК также может проникать в соседник ХрТ


Слайд 84Интерхроматиновое пространство


Слайд 85
Есть ли упорядоченность в 3-d организации интерфазного хроматина?


Слайд 86Distribution of large and small chromosomes in interphase nuclei of human

diploid fibroblasts

Слайд 87Distribution of large and small chromosomes in spherical nuclei of human

lymphocytes

Слайд 88There is a reproducible size-correlated pattern
of radial chromosome arrangement:



large chromosomes are located
towards the periphery of the nucleus



small chromosomes have
a central position



Большие хромосомы тяготеют к периферии
ядра

Маленькие хромосомы тяготеют к центру


Слайд 89How mobile are the chromosome territories

in the interphase nucleus ?
What determines

the size-correlated

distribution of chromosomes ?

Какой механизм расставляет хромосомы по размеру?

Насколько подвижны хромосомные
территории в интерфазе


Слайд 901st cycle
3d cycle
after at least 6 cycles
HeLa cells expressing H2b-GFP after

replication labeling
(with Cy3-dUTP) and segregation of chromosome territories

Слайд 91Cell
cycles:
. . . . .
Labeling scheme
Observation period


Слайд 92Chromosome territories move little, if at all, during interphase
СТ почти не

двигаются в интерфазе

Слайд 93What determines the size-correlated

distribution of chromosomes ?
We suggest that

the answer to this question is
in the positioning of chromosomes in the mitotic cells.

Слайд 94prometaphase rosette of
human fibroblast with labelled
small and large chromosomes
scheme showing the

distribution of
large and small chromosomes
in the prometaphase rosette

Слайд 95We suggest that the difference in the distribution

of small and

large chromosomes is simply inherited

from their arrangement in mitosis




Слайд 96One more important aspect of order

in interphase chromosomes arrangement

Однако, это не

абсолютно

Слайд 97Distribution of gene-poor chromosomes in spherical nuclei of human lymphocytes
Y маленькая,

но и мало генов

Слайд 98Gene content affects chromosome distribution
in spherical nuclei of lymphocytes
Обогащение\обедненность генами влияет

на
позицию хромосом в круглом ядре лимфоцитов

Слайд 99Distribution of gene-poor and gene-dense chromosomes in spherical nuclei of human

T-cell leicemia (Jurkat) cells

Слайд 100The distribution of chromatin homologous to human chromosomes #18 and #19

in lymphoblastoid cells of higher primates corresponds to the positions of these chromosomes in human despite rearrangements of karyotypes

Слайд 101Gene density affects the distribution of interphase
chromosomes:

gene-poor chromosomes tend to occupy
a peripheral position, gene-dense chromosomes
are located in the interior of spherical lymphocyte nuclei


Observations on tumor cells and primates imply that DNA sequences affect the positions of chromosomes containing these specific sequences








Слайд 102The differential positioning of gene-poor and
gene-dense chromosomes necessitates selective
movements during

telophase/ beginning of G1

The forces which drive gene-poor and
gene-dense chromosomes to their specific
positions in interphase nuclei and
timing of these movements remain unknown


Различные позиции ген-бедных и ген-богатых хромосом
требует направленного движения в телофазе\начале G1

Механизм и время распределения хромосом неизвестны


Слайд 103 Nuclei are characterized by a reproducible pattern

of radial chromosome arrangement

Side-by-side chromosome arrangement varies
between nuclei of individual cells

Для ядер характерен воспроизводимый рисунок
радиального распределения хромосом

В ядрах отдельных клеток распределение хромосом
варьирует


Слайд 104Seven chromosome territories (1- 6 and Z) in chicken fibroblast
nucleus

visualized by multi-colour 3D FISH

Слайд 10524-color FISH on 3D preserved human diploid fibroblast nuclei


Слайд 106When and how do chromosomes
change their neigborhood ?
Does this change

take place during interphase ?

Когда и как хромосомы меняют соседей?

Бывают ли изменения в интерфазе?


Слайд 107Cell
cycles:
Labeling scheme
Observation period
. . . . .


Слайд 108When and how chromosomes
change their neigborhood ?
Does this change take

place during interphase ?

NO !

Does it take place during mitosis ?

Хромосомы меняют соседей во время митоза ?

СТ не перемещаются в интерфазе


Слайд 109 What a role do different stages of mitosis play in

chromosome shuffling ?


Manders et al (1999)
JCB, 144(5): 813-821
+
our observations

?

Во время какой фазы митоза хромосомы перемешиваются?


Слайд 110Two sister nuclei of chicken fibroblasts after M-FISH


Слайд 111Symmetrical arrangements of chromosome territories #4 (red), #7 (blue), and #21

(green) in daughter HeLa cells visualized by 3-colour 3D-FISH


The relative positions of chromosomes
change little during anaphase/telophase


Слайд 112 What a role do different stages of mitosis play in

chromosome shuffling ?






Слайд 113Relative positions of chromosome territories #7 and #10
revealed by 3D-

FISH in a clone of 4 HeLa cells

Positions of chromosomes are symmetrical in sister cells
but different in pairs of cousin cells


Слайд 114 What a role do different stages of mitosis play in

chromosome shuffling ?

Слайд 115 Shuffling of chromosomes takes place in prometaphase

During

telophase, the chromosome arrangement established
in metaphase is mainly retained

In telophase / early G1, chromosomal arrangement may be
modified by specific movements of gene-dense and
gene-poor chromosomes

Хромосомы перемещаются друг относительно друга в прометафазе

Порядок хромосом в метафазе сохраняется в телофазе

Позиции хромосом могут модифицироваться в соответствии
с обогащенностью генами в телофазе\G0


Слайд 116Conclusions


The arrangement of chromosome territories is ordered

with regard to size and gene-content of chromosomes

Chromosome territories do not move significantly
during the interphase

The positions of chromosomes in the interphase nucleus are
basically predetermined by their positions in mitotic cells

Neighborhoods of chromosomes are different
between individual cells. Reshuffling of chromosomes
takes place during the prophase - prometaphase transition



Расположение СТ зависит от величины хромосомы и ее насыщенностью генами

СТ не двигаются в интерфазе

Позиция хромосомы в метафазной пластине определяет позицию СТ в ядре


Слайд 117University of Munich
Department of Biology II
Chair of Anthropology
and Human Genetics

Thomas

Cremer Laboratory:

Andreas Bolzer
Alessandro Brero
Felix Habermann
Claudia Weierich
Marion Cremer

Hide Tanabe
Michaela Neusser
Stefan Müller

Lothar Schermelleh
Joachim Walter
Daniela Köhler

Kirchhof-Institute of Physics,
University of Heidelberg

Christoph Cremer Laboratory:

Johann von Hase
Enzo Calcagno
Gregor Kreth

J.Wienberg, University of Munich (LMU)
M.Ferguson-Smith, University of Cambridge
M.Speicher, Technical University of Munich (TU)
A.Jauch, University of Heidelberg
K.Sullivan, Scripps Research Institute
W.C.Earnshaw, University of Edinburgh


Слайд 119Cell. 2009 137(2):356-68.
Nuclear architecture of rod photoreceptor cells adapts to vision

in mammalian evolution.
Solovei ISolovei I, Kreysing MSolovei I, Kreysing M, Lanctôt CSolovei I, Kreysing M, Lanctôt C, Kösem SSolovei I, Kreysing M, Lanctôt C, Kösem S, Peichl LSolovei I, Kreysing M, Lanctôt C, Kösem S, Peichl L, Cremer TSolovei I, Kreysing M, Lanctôt C, Kösem S, Peichl L, Cremer T, Guck JSolovei I, Kreysing M, Lanctôt C, Kösem S, Peichl L, Cremer T, Guck J, Joffe B

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика