Слайд 1
Стрептококки, энтерококки и другие каталазо-отрицательные грамположительные кокки
Слайд 3Семейство Streptococcaceae
Lactococcus spp. (1985 г.), серологическая группа N, «молочнокислые стрептококки»
Lactovum miscens
(2005 г.)
Streptococcus spp. (102 видов, 20 подвидов):
Описано:
2001-2010 гг 36 видов
2013 г. 8 видов
Слайд 4Семейство Streptococcaceae
Род Streptococcus
S. pyogenеs
S. аgalactiae
группы стрептококков C и G
S. pneumoniae
зеленящие
стрептококки
http://www.zazzle.com/streptococcus_greeting_cards-137477854279787331
Слайд 5Электронная фотография стрептококков
Слайд 6Морфология и физиология стрептококков
- Факультативные анаэробы
- Оксидазоотрицательные
- Кталазоотрицательные
- Бродильный тип
метаболизма
- Температурный оптимум 37ºС
- Оптимальная рН 7,2 – 7,6
- Культуральные свойства: на обычных питательных средах патогенные стрептококки или не растут, или растут очень скудно.
требования к средам: основа-аминный азот 7-8 г/л, кровь (баранья,лошадь) 5-7%, сахарный бульон 1%глюкозы ,10-20% сыворотки
Слайд 8Классификационные схемы стрептококков
Экологическая
По биохимическим свойствам
Серологическая (по клеточной стенке)
Патогенетическая (тип гемолиза)
Молекулярно-биологические
Слайд 9Экологическая классификация
1) облигатные паразиты человека
(S. pyogenеs, S. milleri, S. mutans,
S. mitis, S. orale, S. sangius, S. gordonii, S. vestibularis, S. crista)
2) паразиты человека, животные – случайная среда обитания
(S.pneumoniae, S. mitor, S. salivarius)
3) паразиты животных, способные паразитировать в организме человека
(S.agalactiae, S. bovis, S. canis, S. equi, S. cricetus, S. porcinus, S. ratus)
4) облигатные паразиты животных
5) сапрофиты, специфическая микрофлора продуктов
Слайд 10Классификация Шермана (1937 г.)
Температурный фактор:
-Рост при 10 С
- Рост при 45 С
Рост в питательных средах:
- в присутствии 6,5% соли
-на среде с рН 9,6
-с 40% желчи
Редукция метиленового синего(рост в молоке с метиленовым синим)
Терморезистентность (рост после прогревания
при 60 С -30 минут)
Слайд 11Классификация патогенетическая.
Виды гемолиза на КА (в проходящем свете)
Слайд 12Классификация по Берджи, 1997 г.
β-гемолитические
Y-негемолитические (S.bovis Group, S.suis)
α-гемолитические зеленящие (S.pneumoniae, S.mutans
Group, S.salivarius Group, S.anginosus Group, S.sanguinis Group, S.mitis Group)
«необычных» видов (S. acidomimicus, S.pluranimalium, S.thoraltensis, S.uberis, S.parauberis, S.urinalis)
новые виды (S.australis, S.cristatus, S.ovis, S.sinensis, S.entericus, S.gallinaceus)
Слайд 14Серологическая классификация:
Rebecca Lancefield
Группа А
S. pyogenеs
Группа В
S. аgalactiae
Группа С
S. disgalactiae disgalactiae
S. disgalactiae
equisimilis
S. еqui equi
S. equi zooepidermicus
S.phocae
Группа F
S.рhocae
S. anginosus (group)
Группа G
S. anginosus (group)
S. disgalactiae equisimilis
S. canis
Группа D
S. equinus
S. gallolyticus
S. infantarius
Слайд 15Патогенность стрептококков, имеющих медицинское значение
(по А.А.Баранову, Н.И.Брико и др., 2013
г.)
Слайд 16Заболевания, вызываемые стрептококками
Эпидемические заболевания
Первичные кожные инфекции
Гинекологические заболевания
Заболевания, связанные с перекрестно-реагирующими антителами
http://shkolazhizni.ru/archive…
Слайд 17
Клинические формы стрептококковых инфекций
Слайд 20эктима
Заболевания кожи, вызываемые стрептококками
Рожистое воспаление
импетиго
Слайд 21Инвазивные заболевания , вызываемые стрептококками
Миозит
Целлюлит
Слайд 22Эпидемические заболевания, вызываемые стрептококками
Слайд 23http://www.dermweb.com/skininfectionsandinfestations/strep3page.htm
Слайд 24ЭРИТЕМА
(обусловлена сенсибилизацией
к β-гемолитическому стрептококку)
УЗЛОВАТАЯ
КОЛЬЦЕВИДНАЯ
Чаще встречается у молодых чаще встречается у детей,
Узлы не изъязвляются иногда — на фоне ревматической атаки
и не оставляют рубцов
Слайд 35S. agalactiae , СЭМ (х 24.000)
http://kodomo.fbb.msu.ru/~artemov/S.agalactiae/S.agalactiae.html
Streptococcus agalactiae
Слайд 37Новорожденный, пораженный S.agalactiae
Слайд 39Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pneumoniae
входит в состав транзиторной
нормальной микрофлоры
верхнего дыхательного тракта;
Может вызывать пневмонию,
синусит и отит, менингит;
Источником инфекции являются бактерионосители
Путь передачи – воздушно-капельный
Группу риска составляют дети до 4 лет и лица старше 60
С 1995 года возросла распространенность штаммов с множественной лекарственной устойчивостью
Применение пневмококковой вакцины позволило резко снизить заболеваемость
Streptococcus pneumonia –
Клебс (1875г.),
Пастер и Штенберг
(1881г.)
Слайд 40
S. pneumonia – возбудитель
Пневмонии
Менингита
Отита
Септицемии
Назофарингита
Фронтита
Артрита
Синусита
Конъюктивита
S. pneumonia – в 40-60%
случаев формирует условно «здоровое»
бактерионосительство
Слайд 42Морфология
S. pneumoniae в гное. Окраска по Граму. Вокруг диплококков видна неокрашенная
капсула
Грамположительные диплококки ланцетовидной формы, окруженные общей капсулой, неподвижны
Электронная микрофотография S. Pneumoniae. Видны пили
S. pneumoniae (чистая культура). Окраска по Граму.
S. pneumoniae (чистая культура). Окраска по Граму.
Слайд 43Не растет на простых питательных средах. К средам необходимо добавлять кровь
и нормальную сыворотку животных ( 5% эритроцитов и 10% сыворотки животного). Препараты крови являются источниками холина, витаминов и каталазы. Развитие пневмококка заметно улучшается при наличии 5-10% СО²в атмосфере: в этих условиях не наступает присущий пневмококковым культурам аутолиз, обусловленный действием собственного аутолитического фермента.
Оптимальная реакция среды для пневмококка рН 7,6-7,8; температурный оптимум 36-37оС. При температуре выше 45о С и ниже 10о С рост прекращается.
http://eol.org/data_objects/3602485
5% КА с гентамицином (5 мг/мл) для первичного посева.
Ув.х10
Слайд 44Streptococcus pneumoniae, капсульный вариант
Единичные колонии Streptococcus pneumoniae на Columbia sheep blood
agar, 5% CO2.
На кровяном агаре через 24 ч инкубации вырастают мелкие, почти точечные (0,3-0,5 до 1 мм) сероватые, не сливающиеся колонии пневмококка. Через 48 ч колонии увеличиваются, центр их уплощается, и они становятся похожими на игральные шашки. К этому сроку может наступить и полная гибель агаровой культуры в результате аутолиза под действием собственного аутолитического фермента мурамиламидазы (не путать с мурамидазой), разрушающей пептидогликан своей же клеточной стенки.
На средах с кровью колонии окружены зоной позеленения (α -гемолиз ).
Слайд 45"Иммунизация полисахаридной поливалентной вакциной для профилактики пневмококковой инфекции. Методические рекомендации"
(утв. Роспотребнадзором
08.02.2008 N 01/816-8-34)
"МР 3.3.1.0027-11. 3.3.1. Вакцинопрофилактика. Эпидемиология и вакцинопрофилактика инфекции, вызываемой Streptococcus pneumoniae. Методические рекомендации"
(утв. Роспотребнадзором 20.07.2011)
Слайд 46Для профилактики разработана поливалентная вакцина, включающая капсульные полисахаридные антигены 23 сероваров
(Пневмо23, Авентис Пастер, Франция)
Вакцина показана группам риска
Для вакцинации детей в России зарегистрирована семивалентная конъюгированная вакцина Prevnar(PCV-7) компании Вайет Pfizer Inc. – содержит капсульный полисахариды семи серотипов пневмококков и дифтерийный анатоксин
С 2010 года Prevnar (PCV13 -Conjugate)
Специфическая профилактика
Слайд 49Взятие материала
"МУ 4.2.2039-05. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы техника
сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 23.12.2005)
Слайд 50
ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП
Материал для исследований
Влагалищные мазки
Ректальные мазки (можно транспортировать и
исследовать вместе с влагалищными
Моча (берут при свободном мочеиспускании)
слизь с рото-и носоглотки, мокрота
гной, раневое содержимое
кровь
Доставка в лабораторию
Без транспортной среды = в кратчайшие сроки
В жидкой непитательной транспортной среде
Можно хранить при tкомн. несколько дней, но оптимально при +4°С не более 24 ч.
Слайд 51Перенос материала для транспортировки
"Эпидемиологический надзор и профилактика стрептококковой (группы A) инфекции.
Методические указания. МУ 3.1.1885-04"
(утв. Роспотребнадзором 04.03.2004)
Слайд 52Диагностика стрептококковых инфекций
экспресс-методы (бактериоскопия, РАЛ, РП, ПЦР)
бактериологическое исследование
серодиагностика
(антитела к О –
стрептолизину и гиалуронидазе)
Слайд 54Лабораторная диагностика стрептококковой инфекции (1985 г.)
материал
Посев на питательные среды: МПА с
1% глюкозы и 5-10% крови, МПБ с 1%
глюкозы и 10% сыворотки
Микроскопия
Окраска по Граму
Поиск АТ
Ферментативные
свойства
Выделение
чистой
культуры
Лизис с
10% желчи
Рост на
среде
с 40%
желчи
Рост на
среде
с 6,5%
соли
Редукция
метиленовой
сини
Термо-
резис-
тентность
Слайд 56Трудности диагностики:
отсутствие мокроты на ранних сроках заболевания у 10–30 % больных
и невозможность получения бронхиального секрета инвазивными методами из–за тяжести состояния больного, недостаточной квалификации медперсонала либо по другим причинам;
частая контаминация бронхиального содержимого микрофлорой ВДП и полости рта; высокий уровень носительства S. pneumoniae, H. influenzae и других условных патогенов (от 5 до 60 % в разных возрастных группах и коллективах населения);
применение антибактериальных препаратов на догоспитальном этапе.
Слайд 57Рода Гр + м/ов, наиболее часто встречающиеся в клинике
Кокки 2:
Палочки
4:
стафило-, стрепто-
бациллы, клостридии
коринебактерии, листерии
Пневмококки и стафилококки в мазке из мокроты
Слайд 58Рис. 6. Мокрота, мазок, окраска по Граму, световая микроскопия.
Слайд 60Мазок из зева больного ангиной
Из мокроты больного с крупозной пневмонией
Слайд 61Гемокультура S.pyogenes (сепсис)
Слайд 62
ПОСЕВ НА ОБОГАТИТЕЛЬНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Инкубация: 18-24 ч; 5-10% СО2
Бульон LIM /
Тодд-Хевитта (c колистином/гентамицином и налидиксовой кислотой)
Сывороточный бульон: гранулярный или хлопьевидный придонный рост
Кровяной бульон: аналогично + гемолиз
Слайд 63Бульон Todd-Hewitt
Стандартная среда для выращивания стрептококков группы А, особенно для получения
большого количествава М-белка. Неопептон из среды снижает продукцию активных протеиназ, которые разлагают М-белок и сам стимулирует выработку М-белка. Добавление 2% экстракта дрожжей увеличивает число выросших колоний в 3 раза
Слайд 64Рост стрептококков на жидких средах
Слайд 65Экспресс-тесты
Латекс-агглютинация
Слайдекс
Haemophilus influenzae тип b
Streptococcus pneumoniae
Neisseria meningitidis гр. A, B, С
Для
Слайд 66Иммунохроматографический тест (для обнаружения пневмококкового С–полисахарида в моче используют набор BINAX
NOW, обеспечивающий чувствительность до 86 % и специфичность 94 %). При выявлении капсульных антигенов пневмококка в сыворотке крови, моче и мокроте чувствительность теста латекс–агглютинации составляет соответственно 40, 60–70 и 93 %
(~235 руб. за определение)
Слайд 67Системы генерации атмосферы
Контейнеры и газогенераторы
(bioMerieux, Франция)
Использование контейнеров,
газогенераторов и внедрение
разработанных питательных сред, адекватных физиологическим потребностям возбудителя,
позволили в 5-14%% случаев установить этиологический диагноз и определить долю этих заболеваний в этиологической структуре ПИ
Слайд 68
ПОСЕВ НА АГАРОВЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
НЕСЕЛЕКТИВНЫЕ
Кровяной агар: прозрачные или мутноватые , выпуклые,
диаметром 0,5-1 мм, окруженные зоной гемолиза. До 15% штаммов негемолитические.
Среды с крахмалом (агар Гранада, агар Гранада с метатрексатом и др.): красные колонии (пигмент гранадаен)
СЕЛЕКТИВНЫЕ
Колумбийский CNA агар
Агар NNA (неомицин + налидиксовая кислота)
Среды с сульфаметоксазол-триметопримовой добавкой
Агар GBS
StrepBSelect (BioRad)
Селективный агар для стрептококков гр.B (Novamed)
Канамицин-эскулин азидный агар
ХРОМОГЕННЫЕ
ChromAgar StrepB
Информация для размышлений: около 60 % случаев ранней формы инфекции регистрируют у детей, у которых не удалось выделить S.a. на питательных средах
Слайд 69Методика посева на чашку Петри
Третье штрихо-
вание
Первичный посев
тампоны
Первое
штрихование
Второе
штрихование
Слайд 70Рост на кровяном агаре
стафилококк
стрептококк
Слайд 71Морфология колоний на КА
Гладкие
Шероховатые
Мукоидные
3
2
1
4
Слайд 72Матовые колонии S.pyogenes (характерны для образующих большое количество М-белка вирулентных штаммов
возбудителя)
Слайд 73Streptococcus agalactiae (зоны гемолиза в отраженном свете видны далеко не всегда)
Слайд 74Грам-положительные кокки
каталаза
стафилококки
микрококки
стрептококки,
энтерококки
альфа
оценка гемолиза
бета
отсутствие
Слайд 76
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ
Световая микроскопия окрашенных мазков изолятов: длинные цепочки Г+
кокков
Чувствительность к: пенициллину +; бацитрацину (0,04 ЕД) —
CAMP-тест: в присутствии S. aureus/стафилоккового токсина/сенсибилизированных им эритроцитов = интенсивный гемолиз в зоне роста S.a.
Биохимическая идентификация: ферментация глюкозы, трегалозы, лактозы, сахарозы, мальтозы, салицина (непостоянно); отсутствие ферментации инулина, маннита, сорбита, раффинозы; не гидролизует эскулин и желатину, но разлагает гиппурат натрия; 90% штаммов обладают гиалуронидазой (агар Мюллера–Хинтона с 5% дефибринированной крови овцы)
Идентификация изолятов в иммунологических тестах (ИФА, РЛА, ИХТ и др.)
Слайд 77Диагностические тесты, применяемые для идентификации стрептококков
Слайд 79β-гемолитические стрептококки
S.pyogenes
S.dysgalactiae еquisimilis
S.agalactiae
S.equi equi
S.equi zooepidermicus
S.canis
S.anginosus или milleri
S.iniae
Слайд 80Идентификация стрептококков группы А
Выявление группового антигена (PП, РАЛ, иммунохроматография)
реакция агглютинации на
стекле с типовыми агглютинирующими сыворотками. Для этой цели суточную бульонную культуру выделенного стрептококка центрифугируют и разводят осадок в 0,5—1 мл изотонического раствора натрия хлорида. На предметном стекле смешивают каплю сыворотки с каплей испытуемой культуры. Большинство патогенных стрептококков относится к группе А.
Слайд 81бета-гемолиз
ПИР-тест
(бацитрацин)
+
(чувствительны)
-
(устойчивы)
S.pyogenes
гидролиз гиппурата,
(САМР)
-
(-)
+
(+)
S.agalactiae
? Группа D или бета-гем.не А, В,
D
Слайд 82Идентификация стрептококков группы А
ПИР тест (выявление пирролидонилариламидазы)
S.agalactiae S.pyogenes
Слайд 83Идентификация стрептококков группы А
Тест на чувствительность к бацитрацину
(0,04 ЕД/диск)
Слайд 84Идентификация стрептококков группы B
Выявление группового антигена (РАЛ, РП, иммунохроматография)
САМР-тест
Гидролиз гиппурата натрия
(«+», но 98% энтерококков - положительны)
Тест на рост в бульоне с 6,5% NaCl (и энтерококки)
Желчно – эскулиновый тест
(«-», энтерококки и СГД«+»)
Слайд 85Идентификация стрептококков группы B
САМР – тест
«+» S.agalactiae
«-» E.faecalis
S.agalactiae
E.faecalis
S.aureus
Слайд 86Гидролиз гиппурата натрия
(темно-фиолетовое окрашивание)
Слайд 87Тест на рост в бульоне с 6,5% NaCl
Рост в бульоне с
6,5% раствором NaCl. S.agalactiae (гр В) в отличие от других стрептококков устойчив к высокой концентрации хлористого натрия и дает рост в бульоне через 24-48 часа инкубации в термостате при температуре 37 ° С.
Слайд 89Рост Enterococcus faecalis на ЖЭА (почернение среды вокруг колоний)
Слайд 90СhromID Strepto B
Хромогенный агар для S. agalactiae
стрептококки группы В
- круглые жемчужные колонии, от бледно-розового до красного цвета, через 18-24 часа
Слайд 91CHROMagar TMSTREP B
Более широкие возможности по сравнению
с тестами на классических средах:
образуются колонии розово-лилового цвета
возможно определение негемолитических штаммов
результаты через 18 – 24 часа
инкубация в аэробных условиях
Слайд 92Рост S.agalactiae и E.faecalis на HiCrome UTI Agar (HiMedia)
S.agalactiae
E. faecalis
Слайд 93Идентификация зеленящих стрептококков
Слайд 95Антибиотикорезистентность стрептококков
Исключительные фенотипы
(Экспертные правила EUCAST http://www.eucast.org/expert_rules/)
Слайд 96Антибиотикорезистентность стрептококков (Экспертные правила EUCAST http://www.eucast.org/expert_rules/)
Слайд 97Таксономия
Царство - Bacteria
Тип - Firmicutes
Класс - Bacilli
Порядок I -
Bacillales
Семейство VIII Staphylococcaceae
Рода - Staphylococcus, Jeotgalicoccus, Macrococcus, Salinicoccus
Порядок II - Lactobacillales
Семейство IV – Enterococcaceae
Род – Enterococcus, Melissococcus, Tetragenococcus, Vagococcus
Семейство VI – Streptococcaceae
Род – Streptococcus, Lactococcus, Lactovum
Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (2009)
Слайд 98
-Сформирован в 1984 году (стрептококки группы D). В настоящее время род
включает 37 видов (E.thailandicus – описан и введен в род в 2008 г.).
-Внутри рода разделены на 8 групп: Avium, Cecorum, Dispar, Faecalis, Faecium, Gallinarum и отдельно - E.saccharolyticus и E.sulfureus.
Клиническую значимость имеют группы Faecalis (включает E.faecalis, E.haemoperoxydus, E.moraviensis, E.ratti) и группа Faecium (E.faecium, E.canis, E.durans, E.hirae, E.mundtii, E.villorum).
В настоящее время признаны возбудителями ряда заболеваний (E.faecium, E.faecalis, E.durans) - инфекции мочевыводящей системы, кровотока, эндокарда, мягких тканей, ЛОР-органов и зубов (переодонтиты).
-Облигатные представители нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека. Норма содержания в кишечнике:
Дети до 1года на грудном вскармливании – 10 6 - 10 7
на искусств. вскармливании – 10 8 - 10 9
Здоровые взрослые – 10 7 -10 8 КОЕ/г
-Обладают набором факторов патогенности: адгезины, гиалуронидаза, протеиназы, цитолизин (E.faecalis) и др.
Род Enterococcus
Слайд 99Основные представители рода Enterococcus (Koneman et al., 1997)
Устойчив во внешней среде
в отличие от стрептококков
* Устойчив к дез. растворам
* Длительно сохраняется на предметах
* Устойчив к высушиванию, свету, низким температурам(-70 ºС), к нагреванию (60 ºС-30 мин.
* Санитарно-показательные микроорганизмы (наличие в воде говорит о свежем фекальном загрязнении ,
Слайд 102
Энтерококки могут спровоцировать прогрессирование таких заболеваний:
-менингит;
-инфекции мочевыделительной системы.
-Стоит
отметить, что часто энтерококки провоцируют прогрессирование таких недугов у грудничков и у женщин о время беременности;
-бактериальный эндокардит;
-пищевые отравления;
-дисбактериоз. Чаще диагностируется у ребёнка, нежели у взрослого человека;
- бактериемию. В этом случае микроорганизм находятся в урине, но при этом признаков инфекции у человека не наблюдается. Обычно данных инфекционных агентов у женщин, мужчин и детей обнаруживают либо в мочеполовых органах (что объясняет наличие энтерококков в моче), либо в ротовой полости.
Слайд 103Идентификация энтерококков по приказу №535
Слайд 104Дифференциация стрептококков на основе «признаков толерантности»
Слайд 107Хромогенные среды для энтерококков
HiCrome UTI Agar (HiMedia)
HiCrome Enterococcus faecium Agar Base
(HiMedia)
E. faecalis
E.faecium
E.faecalis
Слайд 108Антибиотикорезистентность энтерококков
Исключительные фенотипы
(Экспертные правила EUCAST http://www.eucast.org/expert_rules/)
Слайд 109http://www.zazzle.com/streptococcus_greeting_cards-137477854279787331
Спасибо за внимание