Модификация моноцитов периферической крови аденозином с целью повышения их регенеративного потенциала при аутотрансплантации презентация

ПРИ АУТОТРАНСПЛАНТАЦИИ

Студент 4 курса МБФ Мосунов Иван

Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение
Высшего Профессионального Образования
Сибирский Государственный Медицинский Университет
Центральная Научно-Исследовательская Лаборатория
НОЦ «Клинической и лабораторной иммуногенетики»

cells for cardiac repair: a systematic review and meta-analysis / Abdel-Latif A, Bolli R, Tleyjeh IM, Montori VM, Perin EC, Hornung CA, Zuba-Surma EK, Al-Mallah M, Dawn B.// Arch Intern Med. – 2007 - 167(10) - 989-97].
Доказано, что клеточная терапия стволовыми клетками способствует восстановлению структуры ткани [Lipinski et al; 2007; Impact of intracoronary cell therapy on left ventricular function in the setting of acute myocardial infarction: a collaborative systematic review and meta-analysis of controlled clinical trials. // J Am Coll Cardiol. doi:10.1016/j.jacc.2007.07.041]..
Паракринные факторы, обеспечивающие эффект терапии, не являются уникальными для стволовых клеток и вырабатываются, хотя и в меньшей степени, также клетками периферической крови.

клетки легко выделить из крови человека в количестве, достаточном для культивирования и последующей аутологической трансплантации [Abdel-Latif A Adult bone marrow-derived cells for cardiac repair: a systematic review and meta-analysis / Abdel-Latif A, Bolli R, Tleyjeh IM, Montori VM, Perin EC, Hornung CA, Zuba-Surma EK, Al-Mallah M, Dawn B.// Arch Intern Med. 59 – 2007 - 167(10) - 989-97; Burchfield et al; 2008; Role of paracrine factors in stem and progenitor cell mediated cardiac repair and tissue fibrosis // Fibrogenesis Tissue Repair. doi:10.1186/1755-1536-1-4].
Аденозин (эндогенный нуклеозид), образующийся в повышенных количествах при повреждении ткани, в условиях воспаления и гипоксии, влияет на выработку паракринных факторов различными клетками, в том числе моноцитами [Novitskiy et al.; 2008; Adenosine receptors in regulation of dendritic cell differentiation and function. / Novitskiy SV, Ryzhov SV / Blood; (ISI) Impact factor – 10.555 doi: 10.1182/blood-2008-02-136325].

термической травмы кожных покровов.



Провести модификацию моноцитов периферической крови кроликов аденозином при 72-часовой стимуляции;
Осуществить экспериментальную оценку регенеративного потенциала модифицированных аденозином клеток в модели in vivo.

Задачи

(МНК) из периферической крови методом центрифугирования на градиенте Фиколла;
выделение моноцитов из МНК методом центрифугирования в градиенте Перколла;
культивирование моноцитов в полной питательной среде с ростовыми факторами и цитокинами;
стимуляция моноцитов с использованием негидролизируемого аналога аденозина NECA (5’-N-этилкарбоксамидоаденозин), добавлением DMSO – растворителя NECA – в качестве контроля.
моделирование термического ожога на освобожденном от шерсти участке кожи под наркозом с помощью металлического стержня;
аутологическая трансплантация стимулированных (2-я группа) и не стимулированных клеток (3-я группа), а также введение физиологического раствора (контрольная группа) в место ожога;

CO2-асфиксии;
биопсия пограничного участка здоровой кожи с ожогом;
фиксация кусочков в 10% нейтральном забуференном формалине;
обезвоживание в изопропиловом спирте;
заливка в парафин по методике Ю.А.Криволапова;
приготовление срезов на микротоме;
окраска препаратов гематоксилином и эозином, по методу Ван Гизона;
морфометрия препаратов кожи.

опытная группа 1 опытная группа 2
(10 животных) (10 животных) (10 животных)

забор крови забор крови забор крови

культивирование культивирование
клеток (NECA) клеток (DMSO)
моделирование моделирование моделирование
термического термического термического
ожога ожога ожога

введение введение введение
физ. раствора клеток клеток
в область ожога в область ожога в область ожога

Вывод животных из эксперимента с последующей гистологической оценкой образцов (5, 14 сутки)

способствовать регенерации поврежденных тканей, имея при этом минимальное количество побочных эффектов.

ПРИ АУТОТРАНСПЛАНТАЦИИ

Студент 4 курса МБФ Мосунов Иван