Везикулярный транспорт (лекция 3) презентация

экспериментально на модельных липидных бислойных пузырьках (LUVs, large unilamellar vesicles)

Давление; осмос;
Электрическое поле;
Градиент рН

и без участия белков

GGA1, GGA2, GGA3

???

Окаймления (coats)

ER
COPII: ER > Golgi (ERGIC ?)

(из кислых липидов)

последовательности в молекулах грузов (напр., KDEL, KKXX etc.)
На роль мембранных рецепторов претендуют белки семейства
р24:

на ARF1 под ее действием необходимы для накопления груза;
Она создает временное окно, в течение которого пузырек заполняется грузом

Быстрая - после полной сборки окаймления следует быстрый гидролиз ГТФ на ARF1, отделение пузырька и разборка окаймления; коутомер не является ARFGAP, тем не менее его ассоциация с везикулой значительно ускоряет гидролиз ГТФ.

COPI на эндосомах мало по сравнению с мембранами АГ
4. Дефекты по ε -COP препятствуют образованию мультивезикулярных тел
5. Ассоциация с мембраной зависит от Rab-белков , а не ARF1

ARF6-GTP - локализован на ПМ
ARF6-GDP – локализован на рециклирующих эндосомах
ARF 6 взаимодействует с Rac1 и участвует в реорганизации кортикального актинового цитоскелета

COPI на других органеллах

малая ГТФаза;
два белковых комплекса:
р13/р31 и
р23/р24

СOPII-везикулы

искривление мембраны. Таким образом, в случае COPII-окаймления движущей силой искривления является изменение конформации белков.

adaptor, γ-ear containing, ARF- binding protein) 1,2, 3
HRS/SNX?

определенных условиях (рН 6.7, Mg2+) обладает способностью к самосборке

ассоциируются с мембраной через HRS/SNX
Cемейство SNX (sorting nexins) сод. около 30 членов,
способны взаимодействовать с клатрином и с определенными рецепторами
HRS –взаимодействует с клатрином и с PI3-фосфатом на мембране, узнает ТК рецепторы

Окаймленные ямки

ARF1 (GTP) рекрутирует GGA или АР1
ARF1-GGA рекрутирует рецептор к маннозо-6-фосфату (MPR), что создает условия для сборки клатринового окаймления

транспорт лизосомных белков из TGN в вакуоль (лизосомы). Эндосомы?

ARF1 инициирует сборку
Нуклеация – казеин-киназа1 (csk1) фосфорилирует β3-субъединицу АР3
Сборка окаймления, рекрутирование груза

же ямки могут попадать рецепторы различной природы (метаболические и сигнальные)

2. Сборка идет конститутивно
Фибробласты : 2-3 тыс ОЯ/мин

Оказалось, что на мембране существуют области, «разрешенные» для формирования окаймленных ямок, именно в пределах такой области и может инициироваться сборка новых окаймлений
Большую роль в стабилизации «зон эндоцитоза» играет актиновый цитоскелет

На роль инициаторов претендуют PI(4,5) P2 и синаптотагмин

к LPA остаток арахидоновой кислоты, у которой менее упорядоченная структура и больший диаметр > искривление мембраны

Eps15/epsin – участвуют в сортировке груза, определении границ ОЯ и связи с кортикальным актином. В митозе фосфорилированы, что блокирует эндоцитоз

На начальном этапе формирования ОЯ работают белки, определяющие границу будущей инвагинации

домене рецептора ( в основном метаболические рецепторы, которые постоянно локализуются в ОЯ)
Сигнальные последовательности играют меньшую роль, заякоривание в ОЯ происходит через взаимодействие с сопутствующими белками (accesory proteins) Eps15/epsin. Существенно убиквитинирование груза. Этот механизм характерен для рецепторов, попадающих в ОЯ только в результате стимуляции (рецептор ЭФР)
GPCR (G-protein coupled receptors) – связываются с АР2 через аррестин

LL

Y

1

2

с множеством белков

Поскольку концентрация ГТФ в клетке очень высока (1 mM), то динамин д.бы в основном находиться в ГТФ-св. форме. Но это не так , поскольку осуществляется регуляция обмена нуклеотидов на динамине.

спирали зависит от связанного нуклеотида

GTPγS GDP

участвуют в работе окаймлений (клатриновых и кавеолиноых), Dyn 3 «занимается» тубуляцией
(Т-система скелетных мышц)

разных элементов ОЯ друг с другом происходят в строгой очередности
Как идет его «оркестровка»?

известную нам),
другая (или другие) может оказаться весьма неожиданной