Секвенирование нового поколения (NGS) презентация

Содержание

Революция цены в геномных исследованиях 454 GS20 1000 Геномов SOLiD 3.0 Illumina GA2

Слайд 1Васильев Геннадий Владимирович
Секвенирование нового поколения (NGS)
Институт цитологии и генетики СО РАН


Слайд 2Революция цены в геномных исследованиях

454 GS20

1000 Геномов

SOLiD 3.0
Illumina GA2


Слайд 3Второе поколение секвенаторов – NGS – создатели геномики



Roche FLX Titanium
Illumina HiSeq
SOLiD

5500

Ion Proton


Слайд 4Принцип пиросеквенирования


Слайд 5Пиросеквенирование: приготовление библиотек


Слайд 6Пиросеквенирование: ПЦР в эмульсии


Слайд 7Пиросеквенирование: секвенирование


Слайд 8Пиросеквенирование: секвенирование


Слайд 9Пиросеквенирование: анализ результатов
Особенности:
1) Лучшее качество и высокая цена
2) Невозможность разрешения политрактов

длиннее 5-7-9 осн.
3) Длинные фрагменты (600-800 п.н.) без использования mate-pair библиотек
4) Активно применялся для секвенирования de novo и метагеномов

Ресеквенирование генома S. cerevisiae - 12,070,820 (12 Mb) при 20х покрытии
Total Genomic Coverage 95.14%, Number of Contigs – 694, Average Contig Size 16.547 bases


Слайд 10SOLiD
SOLiD 4
SOLiD 5500
Особенности:
1) Самые короткие чтения 50 или 75

п.н., используется при ресеквенировании и анализе транскриптомов
2) Есть чтение mate-pair библиотек
3) Достаточно высокая точность при использовании специализированного ПО

Слайд 11Шаг 1: Подготовка библиотек


Слайд 12SOLiD: результат ПЦР в эмульсии
1.6 x 109
150 – 300 x 109


Слайд 15Шаг 3: обогащение полученных бидсов


Слайд 16Шаг 4: 3′-модификация концов и нанесение бидсов


Слайд 17SOLiD: Пробы
2 Base Pair Encoding Using 4 Dyes


Слайд 20SOLiD read
SNP
Insertion / Deletion


Слайд 21SOLiD: SNP и ошибки чтения
98% raw base accuracy
99,99% consensus accuracy (~

20x coverage)

SNP

error


Слайд 22Технология фирмы Illumina – HiSeq, MySeq, NextSeq, NovaSeq
Особенности:
Чтения 50-300 п.н.

прямые либо парные
Есть чтение mate-pair библиотек
3) Доминирующая на рынке (80-90%), применяется везде.

Слайд 23Illumina


Слайд 24Illumina


Слайд 25 Illumina


Слайд 26 Illumina GA и HiSeq vs NovaSeq


Слайд 27 Illumina NextSeq и Nova Seq
Используются только два красителя и длины

волн

Слайд 28Ion \ Proton Torrent
Особенности:
1) Не используется высокочувствительная оптика
2) Длинное чтение (до

400 п.н. непостоянной длины)
3) Самая быстрая скорость работы
4) Меньшая точность

Слайд 29Ion \ Proton Torrent - E-PCR


Слайд 30Ion \ Proton Torrent


Слайд 31Ошибки и проблемы NGS
Связанные с пробоподготовкой
Искажения представленности
Химерные последовательности, ошибки баркодирования
Фоновый

шум



Слайд 32 Ошибки кластеризации и баркодирования, поликлональность


Слайд 33Ошибки и проблемы NGS
Связанные с особенностями метода
Искажения представленности
Систематические ошибки
Химерные контиги, ошибки

анализа данных
Неверные алгоритмы анализа



Слайд 34Ошибки и проблемы NGS – анализ Q-scores
+ искажения, вносимые

анализом

Слайд 35Мировая карта NGS систем


Слайд 36Спасибо за внимание


Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика