- Главная
- Разное
- Дизайн
- Бизнес и предпринимательство
- Аналитика
- Образование
- Развлечения
- Красота и здоровье
- Финансы
- Государство
- Путешествия
- Спорт
- Недвижимость
- Армия
- Графика
- Культурология
- Еда и кулинария
- Лингвистика
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Маркетинг
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Полимеразная цепная реакция презентация
Содержание
- 1. Полимеразная цепная реакция
- 2. GGTTCTCGTCGTGTGCACTGCCTCGCCTCGGGGGTGAGAGAGCCTGCTGATCTTCGCCGATTCCTTCCTTGGCAATGGCATCTTCATTCCGAGCAGCCTCGCACTGCATCCCCGTCTCTGCTCCCGCTTCTGCGTTTCCAACGAACCCCTTCTTGTTGCGTTCGGCGCCCATTTGGTCTGGTTTCGGTGGCCTTAGGGTTGGCGTTGAGAATGGTGGGAGTGAGGCGGTGCATCGCCCTCCACATGCTGGATGTGGATTAGGCGTGAGGGCTGGAGCTGGTCGAGTCGATAGAGGAGGAGGCCGTGAAGTTGTGTATGGTTTGTTAGGTCGTCGTGCGGGTGAGAGCAGGAGGGGAAAAGCTGGTGCAGCGTTGCTGCGGGATTTCGGTTCGTCGCGGGGGCGTGTCTTGACTGCTGCCATGACGGATAATATGAAGAATTTGAACCTGGATGACGACAAGTCTGTCAATGGTGACGTCGCCGAAAAGGTGATTGTGTCTTTTGACTGGTTGCTAGTGGTATTGGTGTTGAATCTTCGTGATTCTTCTTTTTGTTCGACTAGCGAATAGTTCGAATGTGAGTTTCTTCTTCTTCCTCCTCTTCTTCTTCTTGTGCTTCTTCTCGGGCTTGAAGGTATCGCGAGTATTAGCCTTCGCATTGATTTGAATTATGTGAACGAGAGCTATGAGATTGTGTAGTAAGGAGTAAATGGCAAGGATGCTGTGTGCGATGCGGCTGAATGAAATTGTCAGCACACAGAAAAAACACGTGGAAGTATTTGAATAAGACAACGTAATAGAAGTTGCTCCACGTTAAATTGACAGGTTAATTCCGTTGGTTTTGCGATAGTATGCTGTGTTATCGTTTCAGACTAAAACATGACGTGTTGTTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTT
- 3. Кэри Маллис американский биохимик, лауреат Нобелевской премии
- 4. В молодости всерьез интересовался математикой и физикой.
- 5. В 1993 году получил Нобелевскую премию
- 6. Репликация (удвоение) ДНК
- 7. Репликация (удвоение) ДНК
- 8. Полимеразная Цепная Реакция
- 9. Размножение участка ДНК Полимеразная Цепная Реакция 1
- 10. Полимеразная Цепная Реакция
- 11. Размножение участка ДНК Полимеразная Цепная Реакция 1 000 000 000 000
- 12. Очистка гена - электрофорез
- 13. Электрофорез – разделение молекул по размеру Детекция результатов ПЦР
- 14. Электрофорез – разделение молекул по размеру
- 15. 1500 1400 1300 1200 Детекция результатов ПЦР
- 16. Применение полимеразной цепной реакции (ПЦР)
- 17. Состав ПЦР-смеси
- 19. Основные компоненты ПЦР и факторы, которые оказывают влияние на результативность процесса
- 20. Основные компоненты ПЦР и факторы, которые оказывают влияние на результативность процесса
- 21. температуры плавления двух праймеров не должны различаться
- 24. Сравнение специфичности и эффективности амплификации геномной ДНК
- 25. Программа для проведения ПЦР
- 26. Типы ПЦР
- 27. ПЦР в реальном времени - это семейство
- 29. Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay)
- 30. Использование интеркалирующих агентов
- 32. Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay)
- 33. Мультиплексная ПЦР Результаты мультиплексной ПЦР ДНК пациента
- 34. Мультиплекс на 9 растительных вирусов температуры отжига
- 35. Мультиплекс на 9 растительных вирусов
- 36. two-steps multiplex RT-PCR one-step mRT-PCR Мультиплекс на 9 растительных вирусов
- 37. Мультиплексная ПЦР в реальном времени
- 38. Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентномеченых зондов для
- 40. Схема цифровой ПЦР с использованием системы QX200™ от Bio-Rad Цифровая ПЦР
- 41. возможность осуществлять точный абсолютный количественный подсчет целевого
- 42. «Гнездовая» ПЦР Уменьшение вероятности амплификации неспецифических фрагментов
- 43. «Гнездовая» ПЦР
- 44. ПЦР + капиллярный электрофорез
- 45. Обратная транскрипция-ПЦР Схема реакции обратной транскрипции
- 46. Опосредованная образованием петель изотермическая амплификация LAMP
- 47. LAMP: регистрация результата Естественный свет УФ свет даже 5 молекул ДНК в 25 мкл детектируются этим методом
- 48. Сравнение эффективности LAMP с добавлением петлевых праймеров (пустые кружки) с классической LAMP (зачернённые кружки)
- 49. Сравнение методов ПЦР и LAMP
Слайд 2GGTTCTCGTCGTGTGCACTGCCTCGCCTCGGGGGTGAGAGAGCCTGCTGATCTTCGCCGATTCCTTCCTTGGCAATGGCATCTTCATTCCGAGCAGCCTCGCACTGCATCCCCGTCTCTGCTCCCGCTTCTGCGTTTCCAACGAACCCCTTCTTGTTGCGTTCGGCGCCCATTTGGTCTGGTTTCGGTGGCCTTAGGGTTGGCGTTGAGAATGGTGGGAGTGAGGCGGTGCATCGCCCTCCACATGCTGGATGTGGATTAGGCGTGAGGGCTGGAGCTGGTCGAGTCGATAGAGGAGGAGGCCGTGAAGTTGTGTATGGTTTGTTAGGTCGTCGTGCGGGTGAGAGCAGGAGGGGAAAAGCTGGTGCAGCGTTGCTGCGGGATTTCGGTTCGTCGCGGGGGCGTGTCTTGACTGCTGCCATGACGGATAATATGAAGAATTTGAACCTGGATGACGACAAGTCTGTCAATGGTGACGTCGCCGAAAAGGTGATTGTGTCTTTTGACTGGTTGCTAGTGGTATTGGTGTTGAATCTTCGTGATTCTTCTTTTTGTTCGACTAGCGAATAGTTCGAATGTGAGTTTCTTCTTCTTCCTCCTCTTCTTCTTCTTGTGCTTCTTCTCGGGCTTGAAGGTATCGCGAGTATTAGCCTTCGCATTGATTTGAATTATGTGAACGAGAGCTATGAGATTGTGTAGTAAGGAGTAAATGGCAAGGATGCTGTGTGCGATGCGGCTGAATGAAATTGTCAGCACACAGAAAAAACACGTGGAAGTATTTGAATAAGACAACGTAATAGAAGTTGCTCCACGTTAAATTGACAGGTTAATTCCGTTGGTTTTGCGATAGTATGCTGTGTTATCGTTTCAGACTAAAACATGACGTGTTGTTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTT
Слайд 3Кэри Маллис
американский биохимик, лауреат Нобелевской премии по химии в 1993 году
Родился
28 декабря 1944 года в г. Ленуар
Родители – фермер Сэсил Бэнкс Маллис и Бернис Альберта.
В детстве Маллис мастерил и запускал самодельные ракеты, экспериментировал с химическими веществами.
Родители – фермер Сэсил Бэнкс Маллис и Бернис Альберта.
В детстве Маллис мастерил и запускал самодельные ракеты, экспериментировал с химическими веществами.
Слайд 4В молодости всерьез интересовался математикой и физикой.
После посещения курса лекций
по астрофизике он опубликовал в престижном научном журнале «Nature» статью «Космологические последствия обращения времени».
Кэри Маллис
Писал стихи и прозу.
Подрабатывал официантом в ресторане, а из мозгов (отловленных там же крыс) выделял нейропептиды для своих исследований.
Поразительное чувство юмора и умение увлечь аудиторию.
Слайд 5В 1993 году получил Нобелевскую премию
«за вклад в развитие методов
химии на основе ДНК – за изобретение метода полимеразной цепной реакции».
Кэри Маллис
Прекрасный пример умения идти к своей цели, не боясь нестандартных подходов в решении задач
Слайд 9Размножение участка ДНК
Полимеразная Цепная Реакция
1 099 511 627 766
метод получения множества
копий определенных фрагментов ДНК
Слайд 21температуры плавления двух праймеров не должны различаться более чем на 5
°С;
ГЦ-состав их должен уложиться в интервал 40–60%;
в структуре олигонуклеотидов не должно быть шпилек (участков, комплементарных друг другу);
праймеры не должны образовывать дуплексы (спариваться) друг с другом.
Еще лучше, если на 3ˊ-конце праймера будет гуанин или цитозин: они образуют с комплементарными основаниями три водородные связи (между А и Т образуются две), что делает комплекс праймер—матрица более стабильным.
ГЦ-состав их должен уложиться в интервал 40–60%;
в структуре олигонуклеотидов не должно быть шпилек (участков, комплементарных друг другу);
праймеры не должны образовывать дуплексы (спариваться) друг с другом.
Еще лучше, если на 3ˊ-конце праймера будет гуанин или цитозин: они образуют с комплементарными основаниями три водородные связи (между А и Т образуются две), что делает комплекс праймер—матрица более стабильным.
Праймеры
Tm(°C) = 2 х (A+T) + 4 х (G+C)
Слайд 24Сравнение специфичности и эффективности амплификации геномной ДНК человека с помощью Taq
ДНК-полимеразы и HS Taq ДНК-полимеразы
А - фрагмент гена KIR длиной 1600 п.о.
Б - фрагмент LINE-последовательности длиной 240 п.о.
30 циклов ПЦР, 5 нг ДНК матрицы на старт. Дорожка М – маркер 1 kb DNA Ladder
В смесь добавляют полимеразу в комплексе с антителами, блокирующими ее активность.
На первой стадии ПЦР (при 95 °С) антитела денатурируют, полимераза освобождается и только тогда начинает работу
Слайд 27ПЦР в реальном времени - это семейство методик количественного PCR со
следующими чертами:
Определение выхода продукта реакции после каждого цикла амплификации.
Построение по этим данным кинетической кривой PCR.
Определение относительной концентрации субстрата на основании анализа этой кривой.
Определение выхода продукта реакции после каждого цикла амплификации.
Построение по этим данным кинетической кривой PCR.
Определение относительной концентрации субстрата на основании анализа этой кривой.
Для детекции PCR-продукта используются флуоресцентные красители, обеспечивающие флуоресценцию, прямо пропорциональную количеству ПЦР-продукта - репортерную флуоресценцию.
Кинетические кривые real-time PCR
Слайд 33Мультиплексная ПЦР
Результаты мультиплексной ПЦР ДНК пациента с миодистрофией Дюшенна.
К дистрофии
приводят различные мутации экзонов гена белка дистрофина.
На дорожке 7 нет полосы, соответствующей экзону 48 (длиной 506 п.н.) этого гена.
На дорожке 7 нет полосы, соответствующей экзону 48 (длиной 506 п.н.) этого гена.
Слайд 34Мультиплекс на 9 растительных вирусов
температуры отжига праймеров не должны сильно разниться (то есть
длина каждого праймера должна быть 18–28 нуклеотидов, а ГЦ-состав — 45–60%);
каждый набор праймеров должен давать фрагмент, отличный от других по размеру, чтобы после электрофореза в геле полосы не совпадали.
каждый набор праймеров должен давать фрагмент, отличный от других по размеру, чтобы после электрофореза в геле полосы не совпадали.
Слайд 38Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентномеченых зондов для видоспецифичной экспресс-идентификации ортопоксвирусов на
основе мультиплексной ПЦР в реальном времени
Зонд Hex
Зонд Fam
Слайд 41возможность осуществлять точный абсолютный количественный подсчет целевого фрагмента ДНК в образце;
чувствительность
системы, которая позволяет детектировать единичные молекулы ДНК-мишени даже при низкой её концентрации в образце;
стабильность системы и её устойчивость к ингибиторам ПЦР
стабильность системы и её устойчивость к ингибиторам ПЦР
Цифровая ПЦР
Слайд 42«Гнездовая» ПЦР
Уменьшение вероятности амплификации неспецифических фрагментов
В одной пробирке
В два раунда
Гнездовая ПЦР
используется для детекции ДНК в следовых количествах (1-100 копий на пробу).
Слайд 46Опосредованная образованием петель изотермическая амплификация
LAMP (loop-mediated isothermal amplification)
Bst-полимераза
из Bacillus stearothermophilus, совмещающая полимеразную и хеликазную активности
исключается фаза денатурации, реакция проводится при 60–65 °С
используется четыре или шесть праймеров, что увеличивает специфичность реакции
повышается вероятность артефактов и эффекта множественности полос в электрофорезном геле
НО
Слайд 47 LAMP: регистрация результата
Естественный свет
УФ свет
даже 5 молекул ДНК в 25 мкл детектируются этим
методом
Слайд 48Сравнение эффективности LAMP с добавлением петлевых праймеров (пустые кружки) с классической
LAMP (зачернённые кружки)
