Полимеразная цепная реакция презентация

Содержание

GGTTCTCGTCGTGTGCACTGCCTCGCCTCGGGGGTGAGAGAGCCTGCTGATCTTCGCCGATTCCTTCCTTGGCAATGGCATCTTCATTCCGAGCAGCCTCGCACTGCATCCCCGTCTCTGCTCCCGCTTCTGCGTTTCCAACGAACCCCTTCTTGTTGCGTTCGGCGCCCATTTGGTCTGGTTTCGGTGGCCTTAGGGTTGGCGTTGAGAATGGTGGGAGTGAGGCGGTGCATCGCCCTCCACATGCTGGATGTGGATTAGGCGTGAGGGCTGGAGCTGGTCGAGTCGATAGAGGAGGAGGCCGTGAAGTTGTGTATGGTTTGTTAGGTCGTCGTGCGGGTGAGAGCAGGAGGGGAAAAGCTGGTGCAGCGTTGCTGCGGGATTTCGGTTCGTCGCGGGGGCGTGTCTTGACTGCTGCCATGACGGATAATATGAAGAATTTGAACCTGGATGACGACAAGTCTGTCAATGGTGACGTCGCCGAAAAGGTGATTGTGTCTTTTGACTGGTTGCTAGTGGTATTGGTGTTGAATCTTCGTGATTCTTCTTTTTGTTCGACTAGCGAATAGTTCGAATGTGAGTTTCTTCTTCTTCCTCCTCTTCTTCTTCTTGTGCTTCTTCTCGGGCTTGAAGGTATCGCGAGTATTAGCCTTCGCATTGATTTGAATTATGTGAACGAGAGCTATGAGATTGTGTAGTAAGGAGTAAATGGCAAGGATGCTGTGTGCGATGCGGCTGAATGAAATTGTCAGCACACAGAAAAAACACGTGGAAGTATTTGAATAAGACAACGTAATAGAAGTTGCTCCACGTTAAATTGACAGGTTAATTCCGTTGGTTTTGCGATAGTATGCTGTGTTATCGTTTCAGACTAAAACATGACGTGTTGTTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTT

Слайд 1Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Слайд 2GGTTCTCGTCGTGTGCACTGCCTCGCCTCGGGGGTGAGAGAGCCTGCTGATCTTCGCCGATTCCTTCCTTGGCAATGGCATCTTCATTCCGAGCAGCCTCGCACTGCATCCCCGTCTCTGCTCCCGCTTCTGCGTTTCCAACGAACCCCTTCTTGTTGCGTTCGGCGCCCATTTGGTCTGGTTTCGGTGGCCTTAGGGTTGGCGTTGAGAATGGTGGGAGTGAGGCGGTGCATCGCCCTCCACATGCTGGATGTGGATTAGGCGTGAGGGCTGGAGCTGGTCGAGTCGATAGAGGAGGAGGCCGTGAAGTTGTGTATGGTTTGTTAGGTCGTCGTGCGGGTGAGAGCAGGAGGGGAAAAGCTGGTGCAGCGTTGCTGCGGGATTTCGGTTCGTCGCGGGGGCGTGTCTTGACTGCTGCCATGACGGATAATATGAAGAATTTGAACCTGGATGACGACAAGTCTGTCAATGGTGACGTCGCCGAAAAGGTGATTGTGTCTTTTGACTGGTTGCTAGTGGTATTGGTGTTGAATCTTCGTGATTCTTCTTTTTGTTCGACTAGCGAATAGTTCGAATGTGAGTTTCTTCTTCTTCCTCCTCTTCTTCTTCTTGTGCTTCTTCTCGGGCTTGAAGGTATCGCGAGTATTAGCCTTCGCATTGATTTGAATTATGTGAACGAGAGCTATGAGATTGTGTAGTAAGGAGTAAATGGCAAGGATGCTGTGTGCGATGCGGCTGAATGAAATTGTCAGCACACAGAAAAAACACGTGGAAGTATTTGAATAAGACAACGTAATAGAAGTTGCTCCACGTTAAATTGACAGGTTAATTCCGTTGGTTTTGCGATAGTATGCTGTGTTATCGTTTCAGACTAAAACATGACGTGTTGTTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTTGTTACATTCAAACTCCGTCTCTCCTATGGCATGAAGCTGGTTAATCGATTGTATTCCTAATGTTGAGTGTAACTAGGGTTTGACATTGACAAGCTTAGTCTCACATCATTAAAGAATCGGCGTGAATAGCACTTAAGAACATCATCAAAATTAGGAATTCACCTCCGACTGAAGTTGAATGATTAGATATAAAATAATAAATAATAATAAATAATAAAAAAAACTAAAAAAACTAAATTAACAGGATTAGCACACGCAATAACTTAATCAAAGTCTTCCCAGACTCGAACGTGTGCATCTTGAACTTAGTTCTGATTTACTAGGTTGTTTCTGCTAGATTGTCAGTCGAAAATATGCTAGGAATATTTCGAGCTTAAAAGAGTTCTCAAAAGTTTCATGTTCAGTCTCCATGTTTTAAGCTTGTATTCCTGTGATTTTTCTCTAAGTTTCCCGTTGATGGCGTAGAACGATTAGGGTAAGAAATGATTATGCAACTGAAACTTGGCTGGTTTGAACTGCTGTAGTTAGTTTTGCATTTGATAAATTGCTGAGTCTTACAGCACTGATTTGTTTGTCTT

Слайд 3Кэри Маллис
американский биохимик, лауреат Нобелевской премии по химии в 1993 году
Родился

28 декабря 1944 года в г. Ленуар
Родители – фермер Сэсил Бэнкс Маллис и Бернис Альберта.
В детстве Маллис мастерил и запускал самодельные ракеты, экспериментировал с химическими веществами.

Слайд 4В молодости всерьез интересовался математикой и физикой.
После посещения курса лекций

по астрофизике он опубликовал в престижном научном журнале «Nature» статью «Космологические последствия обращения времени».

Кэри Маллис

Писал стихи и прозу.
Подрабатывал официантом в ресторане, а из мозгов (отловленных там же крыс) выделял нейропептиды для своих исследований.
Поразительное чувство юмора и умение увлечь аудиторию.

Слайд 5В 1993 году получил Нобелевскую премию
«за вклад в развитие методов

химии на основе ДНК – за изобретение метода полимеразной цепной реакции».

Кэри Маллис

Прекрасный пример умения идти к своей цели, не боясь нестандартных подходов в решении задач

Слайд 6Репликация (удвоение) ДНК

Слайд 7Репликация (удвоение) ДНК

Слайд 8Полимеразная Цепная Реакция

Слайд 9Размножение участка ДНК
Полимеразная Цепная Реакция
1 099 511 627 766
метод получения множества

копий определенных фрагментов ДНК

Слайд 10Полимеразная Цепная Реакция

Слайд 11Размножение участка ДНК
Полимеразная Цепная Реакция
1 000 000 000 000

Слайд 12Очистка гена - электрофорез

Слайд 13Электрофорез – разделение молекул по размеру
Детекция результатов ПЦР

Слайд 14Электрофорез – разделение молекул по размеру

Слайд 15
1500

1400

1300

1200



Детекция результатов ПЦР

Слайд 16Применение полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Слайд 17Состав ПЦР-смеси

Слайд 19Основные компоненты ПЦР и факторы, которые оказывают влияние на результативность процесса

Слайд 20Основные компоненты ПЦР и факторы, которые оказывают влияние на результативность процесса

Слайд 21температуры плавления двух праймеров не должны различаться более чем на 5

°С;
ГЦ-состав их должен уложиться в интервал 40–60%;
в структуре олигонуклеотидов не должно быть шпилек (участков, комплементарных друг другу);
праймеры не должны образовывать дуплексы (спариваться) друг с другом.
Еще лучше, если на 3ˊ-конце праймера будет гуанин или цитозин: они образуют с комплементарными основаниями три водородные связи (между А и Т образуются две), что делает комплекс праймер—матрица более стабильным.

Праймеры

Tm(°C) = 2 х (A+T) + 4 х (G+C)

Слайд 24Сравнение специфичности и эффективности амплификации геномной ДНК человека с помощью Taq

ДНК-полимеразы и HS Taq ДНК-полимеразы

А - фрагмент гена KIR длиной 1600 п.о. Б - фрагмент LINE-последовательности длиной 240 п.о. 30 циклов ПЦР, 5 нг ДНК матрицы на старт. Дорожка М – маркер 1 kb DNA Ladder

В смесь добавляют полимеразу в комплексе с антителами, блокирующими ее активность.

На первой стадии ПЦР (при 95 °С) антитела денатурируют, полимераза освобождается и только тогда начинает работу

Слайд 25Программа для проведения ПЦР

Слайд 26Типы ПЦР

Слайд 27ПЦР в реальном времени - это семейство методик количественного PCR со

следующими чертами:

Определение выхода продукта реакции после каждого цикла амплификации.
Построение по этим данным кинетической кривой PCR.
Определение относительной концентрации субстрата на основании анализа этой кривой.

Для детекции PCR-продукта используются флуоресцентные красители, обеспечивающие флуоресценцию, прямо пропорциональную количеству ПЦР-продукта - репортерную флуоресценцию.

Кинетические кривые real-time PCR

Слайд 29 Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay)

Слайд 30Использование интеркалирующих агентов

Слайд 32 Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay)

Слайд 33Мультиплексная ПЦР
Результаты мультиплексной ПЦР ДНК пациента с миодистрофией Дюшенна.

К дистрофии

приводят различные мутации экзонов гена белка дистрофина.

На дорожке 7 нет полосы, соответствующей экзону 48 (длиной 506 п.н.) этого гена.

Слайд 34Мультиплекс на 9 растительных вирусов
температуры отжига праймеров не должны сильно разниться (то есть

длина каждого праймера должна быть 18–28 нуклеотидов, а ГЦ-состав — 45–60%);

каждый набор праймеров должен давать фрагмент, отличный от других по размеру, чтобы после электрофореза в геле полосы не совпадали.

Слайд 35Мультиплекс на 9 растительных вирусов

Слайд 36two-steps multiplex RT-PCR
one-step mRT-PCR
Мультиплекс на 9 растительных вирусов

Слайд 37Мультиплексная ПЦР в реальном времени

Слайд 38Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентномеченых зондов для видоспецифичной экспресс-идентификации ортопоксвирусов на

основе мультиплексной ПЦР в реальном времени

Зонд Hex

Зонд Fam

Слайд 40Схема цифровой ПЦР с использованием системы QX200™ от Bio-Rad
Цифровая ПЦР

Слайд 41возможность осуществлять точный абсолютный количественный подсчет целевого фрагмента ДНК в образце;
чувствительность

системы, которая позволяет детектировать единичные молекулы ДНК-мишени даже при низкой её концентрации в образце;
стабильность системы и её устойчивость к ингибиторам ПЦР

Цифровая ПЦР

Слайд 42«Гнездовая» ПЦР
Уменьшение вероятности амплификации неспецифических фрагментов
В одной пробирке
В два раунда
Гнездовая ПЦР

используется для детекции ДНК в следовых количествах (1-100 копий на пробу). 

Слайд 43«Гнездовая» ПЦР

Слайд 44ПЦР + капиллярный электрофорез

Слайд 45Обратная транскрипция-ПЦР
Схема реакции обратной транскрипции

Слайд 46Опосредованная образованием петель изотермическая амплификация
LAMP (loop-mediated isothermal amplification)
Bst-полимераза

из Bacillus stearothermophilus, совмещающая полимеразную и хеликазную активности

исключается фаза денатурации, реакция проводится при 60–65 °С

используется четыре или шесть праймеров, что увеличивает специфичность реакции

повышается вероятность артефактов и эффекта множественности полос в электрофорезном геле

НО

Слайд 47 LAMP: регистрация результата
Естественный свет
УФ свет
даже 5 молекул ДНК в 25 мкл детектируются этим

методом

Слайд 48Сравнение эффективности LAMP с добавлением петлевых праймеров (пустые кружки) с классической

LAMP (зачернённые кружки)

Слайд 49Сравнение методов ПЦР и LAMP

Похожие презентации

Биология как наука. Основные свойства живого 293
Редис. Биологические особенности 472
Жыныс генетикасы 592
Весенние явления в природе Подмосковья 427
Юбилею Ф.И.Шаляпина посвящается 497
Химический состав бактериальной клетки 647

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.

Для правообладателей

Яндекс.Метрика