Перепрограммирование геномов дифференцированных клеток с использованием экзогенной экспрессии транскрипционных факторов презентация

дифференцировки

Перенос ядер в энуклеированный ооцит или яйцеклетку – технология клонирования животных.
1952 – Briggs and King; 1997 - Wilmut et al., 1997;

Слияние эмбриональных стволовых клеток с дифференцированными – технология гибридных клеток.
1996 – Матвеева и др.

Трансфекция дифференцированных клеток векторами экспрессирующие транскрипционные факторы и факторы регулирующие пролиферацию.
2006 – Takahashi and Yamanaka

(Takahashi and Yamanaka 2006)

c-MYC, и Klf4 в присутствии или отсуствии
индуцированной доксициклином экспрессии Oct4

По данным Maherali et al. 2007

Maherali et al. 2007
А- локализация мРНК Xist, Tsix и Pgk1 в ядрах

агути – маркер линии O18 iPS;
в,с – два потомка с маркером
GFP iPS клеток;
d,e – эмбрионы, полученные от
инъекций iPS клеток разных
линий в тетраплоидные
бластоцисты.

с
мышами C57BL.

Окраска потомков F2 в скрещивании iPS мышей с C57BL
(Okita et al., 2007)

2007).
ЭС клетки иммортальны и имеют активный открытый хроматин. с-Myc
индуцирует эти важные свойства в фибробластах, Klf4 препятствует апоптозу, а Oct4 вместе с Sox2 необходимы для поддержания плюрипотентности.

et al., 2007)

IPS клетки (Yu et al., 2007)

маркированных GFP и NeoR (Yu et al.,
20 November 2007)

фибробластов со свойствами
ЭСК (Yu et al., 2007)

суспензии ЭСК (Н1) и iPS клеток-производных культуры
клеток IMR90) (Yu et al., 2007)

фибробластов, ЭСК–Н1 и серии клонов iPS клеток. Темные кружки –
метилированные CpG-сайты, светлые неметилированные (Yu et al., 2007)

инъекции тестируемых клеток иммунодефицитным мышам.
А – нейральная ткань; В – костная ткань; С – первичная кишка и D – малодиф-
ференцированный эпителий (Yu et al., 2007)

30-специфичных генов
экспрессия которых специфична для ЭСК;

Средний – 25 генов экспрессирующихся в
IMR90 клетках;

Нижний – 25 генов, экспрессия которых
характерна для фибробластов крайней
плоти новорожденных.
(Yu et al., 2007)

морфология фибробластов;
С – вид колонии не ЭС клеток;
D – вид колонии ЭСК человека;
Е – вид колонии iPS клеток (пассаж 6);
F – колония iPS клеток при
большем увеличении;
G – спонтанная дифференцировка в
центре колонии iPS клеток;
Н – N – иммуногистология: SSEA1 (H),
SSEA3 (I), SSEA4 (J), TRA-1-60 (K),
TRA-1-61 (L), TRA-2-49-AP (M),
Nanog (N). (Takahashi et al., 2007)

фибробластах
и клонах iPS клеток;

В – Вестерн-блот белковых
маркеров ЭС клеток
(Takahashi et al., 2007)

дериватов 3-х
зародыщевых листков (Takahashi et al., 2007)

2007)

и ЭС клеток человека (ES). Стрелками показана экспрессия
генов Nanog, Oct4 и Sox2. Красные линии выделяют 5-ти кратные различия в
экспрессии генов сравниваемых типов клеток (Takahashi et al., 2007)

5107 генов имеют 5-ти кратные различия в экспрессии между фибробластами и
iPS клетками, а между фибробластами и ЭС 6083. 1267 генов различаются 5-ти
кратно по экспрессии между iPS и ЭС клетками.

типов клеток, из которых получены iPSC

соматического генома в iPSC.
(Papp and Plath Cell Research 2011online:doi:10.1038/cr.2011.28)