Методы исследования нуклеиновых кислот. Рекомбинантные ДНК. Генная терапия. Трансгенные организмы презентация

Содержание

Методы исследования нуклеиновых кислот. Молекулярно-генетические методы — большая и разнообразная группа методов, в конечном счете, предназначенных для выявления вариаций в структуре исследуемого участка ДНК (аллеля, гена, региона хромосомы) вплоть до расшифровки

Слайд 1Методы исследования нуклеиновых кислот. Рекомбинантные ДНК. Генная терапия. Трансгенные организмы. Клонирование клеток

и организмов.

Слайд 2Методы исследования нуклеиновых кислот.
Молекулярно-генетические методы — большая и разнообразная группа методов,

в конечном счете, предназначенных для выявления вариаций в структуре исследуемого участка ДНК (аллеля, гена, региона хромосомы) вплоть до расшифровки первичной последовательности оснований. В основе этих методов лежат «манипуляции» с ДНК и РНК.

Слайд 3Основные понятия
Рестриктазы (эндонуклеазы рестрикции) группа ферментов, относящихся к классу гидролаз,

катализирующих реакцию гидролиза НК (ДНК) В отличие от экзонуклеаз, рестриктазы расщепляют ДНК не с конца молекулы, а в определенных сайтах. При этом каждая рестриктаза узнаёт определённую нуклеотидную последовательность (от 4-х п.н. и расщепляет нуклеотидную цепь внутри участка узнавания или вне его. Открыты в 1970-х гг.

Слайд 4Радиоавтография - метод изучения распределения радиоактивных веществ в исследуемом объекте
Гибридизационные

зонды (DNA/cDNA probes) генно-инженерные или синтетические олигонуклеотидные последовательности, комплементарные к известным участкам специфических, в том числе и вирусных, нуклеиновых кислот; используются в диагностических целях для постановки ДНК/РНК-гибридизации; для выявления гибридизации, т. е. соединения с искомой нуклеиновой кислотой, гибридизационные зонды несут какую-либо метку, выявляемую лабораторными приборами, чаще всего такой меткой служит радиоактивный изотоп или флюорофор.


Слайд 5Основные ферменты, используемые в генной инженерии


Слайд 6Методы
Электрофорез фрагментов ДНК обеспечивает разделение фрагментов при их распределении на

поверхности агарозного или полиакриламидного геля. Фрагменты ДНК движутся в геле, помещённом в постоянное электрическое поле, от отрицательного полюса к положительному в зависимости от размеров (чем больше относительная молекулярная масса фрагмента, тем медленнее он движется в электрическом поле). После окончания электрофореза каждый фрагмент ДНК занимает определённое положение в виде дискретной полосы в конкретном месте геля.

Слайд 7Метод «сэндвич»- гибридизации - является одной из разновидностей зондовой технологии. При

его исполь­зовании применяются два зонда, гомологичные различным участкам искомой нуклеиновой кис­лоты. Один зонд фиксируют на мем­бране для того, чтобы связать искомую нуклеи­новую кислоту, присутствующую в исследуемом образце. После осуществления гибридизации мембрану отмывают от исследуемого материала и добавляют раствор, содержащий второй зонд, который имеет определенную метку. Процесс гибридизации проводят повторно, и при этом зонд с меткой взаимодействует с искомым участ­ком ДНК (РНК).


Слайд 8Методы блот-гибридизации.
ДНК, разделенную гель-электрофорезом переносят с геля на нитроцеллюлозный фильтр.

Ее денатурируют в геле щелочью, нейтрализуют гель, и затем прикладывают к нему нитроцеллюлозный фильтр, обеспечивая медленный ток буфера через гель и фильтр. Денатурированная ДНК диффундирует и задерживается на фильтре, после нагрева-ния, которого в вакууме она «запекается» и иммобили­зуется, т. е. обездвиживается на фильтре, в отличие от геля фильтр с ДНК мо-жно использовать для последующей гибриди­зации с меченой пробой, т. е. с мечеными ДНК и РНК. Процедура переноса ДНК с геля на фильтр обознача­ется английским термином blotting (промокание). Поэтому для таких фильтров с ДНК используется термин «блот».


Слайд 10КЛОНИРОВАНИЕ ФРАГМЕНТОВ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ IN VITRO.
В большинстве случаев для успешной

диагностики болезни или гетерози­готного состояния достаточно исследовать лишь небольшой фрагмент генома, поэтому для проведения анализа необходимо получить достаточное количе­ство таких фрагментов, т.е. амплифицировать (умножить) их.

Слайд 11Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод амплификации ДНК in vitro. В

течение нескольких часов можно размножить определённую последователь­ность ДНК в количестве, превышающем исходное в миллион раз и более. Следовательно, исходно требуется очень незначительное количество материа­ла. Необходимым условием для проведения ПЦР является знание нуклеотидной последовательности амплифицируемого фрагмента или, по крайней мере, этого фрагмента.

Слайд 12Процесс амплификации заключается в осуществлении повторяющихся циклов. Каждый цикл включает 3

стадии:
1. Температурная денатурация ДНК (разделение двухцепочечной ДНК на одноцепочечные молекулы)
2. Присоединение праймеров к комплементарным последовательностям одноцепочечных молекул (отжиг)
3. Синтез полинуклеотидных цепей на одноцепочечных молекулах в границах присоединенных праймеров с помощью полимеразы.


Слайд 14Секвенирование ДНК
Определение нуклеотидной последователь­ности.
Метод секвенирования по Максаму — Гилберту основан

на химическом расщеплении ДНК по определенному основанию.
Другой ферментативный метод (метод Сэнгера) базируется на применении аналогов нуклеотидов, прерываю­щих синтез комплементарной цепи ДНК по одноцепочечной матрице в месте встраивания в цепь соответствующего аналога.

Слайд 15Секвенирова­ние позволяет определить полную нуклеотидную последовательность всех хромосом, всего ДНК любого

генома, любого организма. Это уже почти полностью сделано для некоторых бактерий, мухи дрозофилы, мыши и человека. Кроме того, этот метод позволяет определить по­следовательность нуклеотидов любых генов, что дает возможность их синтеза.


Слайд 16Рекомбинантные ДНК
Рекомбинантная ДНК это молекула ДНК, полученная в результате объединения in

vitro чужеродных (в природе никогда вместе не существующих) фрагментов ДНК с использованием методов генной инженерии

Слайд 18Генная инженерия и генная терапия.


Слайд 19Генная инженерия

ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ, или технология рекомбинантных ДНК, изменение с помощью биохимических

и генетических методик хромосомного материала – основного наследственного вещества клеток.

Слайд 20

Если внести в организм (растение, микроорганизм, животное или даже человек) новые

гены, то можно наделить его новой желательной характеристикой, которой до этого он никогда не обладал.

Слайд 21Изменения генов прежде всего связано с преобразованием химической структуры ДНК: изменение

последовательности нуклеотидов в хромосомной ДНК, выпадение одних и включение других нуклеотидов меняют состав образующихся на ДНК молекулы РНК, а это, в свою очередь, обуславливает новую последовательность аминокислот при синтезе.
В результате в клетке начинает синтезироваться новый белок, что приводит к появлению у организма новых свойств.

Слайд 22Генная инженерия берет свое начало в 1973 году, когда генетики Стэнли

Кохен и Герберт Бойер внедрили новый ген в бактерию кишечной палочки.

Слайд 23Генная терапия -новая область современной биомедицины, основанная на введении в организм

больного рекомбинантных генетических конструкций с лечебной целью.


Слайд 24
- введение ретровирусного вектора, экспрессирующего ген аденозиндеаминазы (ADA) (частота встречаемости

1:100 000) двум больным, страдающим комбинированным иммунодефицитом ADA-SCID (недостаточность аденозиндеаминазы)
(National Institute of Health (NIH), Bethesda, USA)

14 сентября 1990 г.


Слайд 25Концепция генной терапии существует уже на протяжении последних десятилетий. Она заключатся

в том, что наиболее радикальным способом борьбы с разного рода заболеваниями, вызываемыми изменениями генетического содержания клеток, должна быть обработка, направленная непосредственно на исправление или уничтожение самой генетической причины заболевания, а не ее следствий.

Слайд 26Цель генной терапии – устранить причину заболевания, то есть генетический дефект.



Слайд 27Методы генной терапии:
Используют два основных подхода, различающиеся природой клеток- мишеней:
- фетальную

генотерапию , при которой чужеродную ДНК вводят в зиготу или эмбрион на ранней стадии развития; при этом ожидается, что введенный материал попадет во все клетки реципиента (и даже в половые клетки, обеспечив тем самым передачу следующему поколению), и
- соматическую генотерапию , при которой генетический материал вводят только в соматические клетки и он не передается половым клеткам.
Есть и третий подход - активация собственных генов организма с целью полного или частичного преодоления действия мутантного гена. Яркий пример такого подхода - использование гидроксимочевины для активации синтеза гемоглобина F у больных с серповидноклеточной анемией и талассемиями


Слайд 28Подходы генной терапии
Замещение нефункционального гена – потенциально самый простой и

эффективный способ, но…
Компенсация утраченной функции - добавление функциональной копии гена:Можно применять, если болезнь вызвана потерей функции гена (рецессивная мутация)
Подавление функции гена - добавление «ингибирующего» гена :Для болезней, вызванных чрезмерной активностью гена (доминантная мутация)


Слайд 29Подходы генной терапии
Подавление активности гена:

Можно использовать механизм РНК-интерференции
РНК может

вводится в пораженные ткани в «голом» виде или в составе экспрессирующей конструкции

Уничтожение мутантных клеток – лечение рака


Слайд 30Методы доставки генов в клетки
Невирусные:
•Прямая инъекция ДНК в ткани
•Искусственные липосомы
Вирусные:
•Эволюционно

«адаптированы» к организму человека •Специфичны к определенному типу клеток
•Используют модифицированные вирусы, утратившие способность размножаться


Слайд 31Аденовирусы вызывают легкие формы инфекции верхних дыхательных путей (обычную простуду). Инфицируют

широкий диапазон делящихся и неделящихся клеток, находятся в эписомальном состоянии
Аденоассоциированные вирусы
•Вызывает бессимптомные инфекции, вызывает слабый иммунный ответ •Инфицируют широкий диапазон делящихся и неделящихся клеток
•Не может размножаться в отсутствии аденовируса



Слайд 32Бакуловирусы
Вирусы насекомых, могут инфицировать человеческие клетки, но не могут в

них размножаться Инфицируют преимущественно клетки печени, находятся в эписомальном состоянии
Вирусы герпеса
Имеет специфичность в отношении нервных клеток, могут установиться пожизненные латентные инфекции, находятся в эписомальном или интегрированном состоянии
Ретровирусы
Инфицируют только делящиеся клетки, интегрирует в геном хозяина, особенно пригодны для терапии рака

Слайд 33Генная терапия ex vivo
Копию терапевтического гена встраивают в вирусную ДНК


Пораженные клетки извлекают из пациента и выращивают в культуре
Культура клеток заражается генетически модифицированным вирусом
Модифицированные клетки возвращают в пациента
Терапевтический ген начинает работать в пораженных тканях


Слайд 34Генная терапия in vivo
Терапевтический ген вставляют в вирусную ДНК, липосому или

в кольцевую молекулу (плазмиду)
ДНК вводят в ткани пациента путем тканеспецифической инъекции
Терапевтический ген начинает работать в пораженных клетках

Слайд 35Перспективы применения генотерапии в мире
•Первой страной, разрешившей применение препаратов для генной

терапии, стал Китай, где с 2003 года разрешены и официально применяются два препарата – «Gendicine» и «Oncorine», предназначенные для лечения тяжелых форм рака шеи и головы
•В декабре 2011 года российский Институт Стволовых Клеток Человека получил регистрационное удостоверение на геннотерапевтический препарат «Неоваскулген», предназначенный для лечения ишемии нижних конечностей
•Препарат «Glybera» стал четвертым в мире геннотерапевтическим лекарством, получившим официальное одобрение


Слайд 36Трансгенные организмы.
Трансге́нный органи́зм — живой организм, в геном которого искусственно введен

ген другого организма. Ген, который вводят в трансформируемый организм, чтобы придать ему новые свойства, носит название целевого гена, или гена интереса.



Слайд 37Целью создания трансгенных организмов является получение организма с новыми свойствами. Клетки

трансгенного организма производят белок, ген которого был внедрен в геном. Новый белок могут производить все клетки организма (неспецифическая экспрессия нового гена), либо определенные клеточные типы (специфическая экспрессия нового гена).


Слайд 38Создание трансгенных организмов используют:

в научном эксперименте для развития технологии создания трансгенных

организмов, для изучения роли определенных генов и белков, для изучения многих биологических процессов; огромное значение в научном эксперименте получили трансгенные организмы с маркерными генами (продукты этих генов с легкостью определяются приборами, например зелёный флуоресцентный белок, визуализируют с помощью микроскопа, так легко можно определить происхождение клеток, их судьбу в организме и т. д.);
в сельском хозяйстве для получения новых сортов растений и пород животных;
в биотехнологическом производстве плазмид и белков.

Слайд 39В различных отраслях хозяйственной деятельности человека используются трансгенные бактерии. Кроме того,

что бактерии используются для клонирования генов и производства белка, они реконструируются и для других целей.

Слайд 40Разрабатываются трансгенные растения, способные продуцировать в интересах человека химические вещества и

лекарства. Реконструирован картофель для продукции альбумина человека. Предполагается, что в будущем растения смогут образовывать в своих семенах такие белки, как гормоны человека. Быстрыми темпами развивается биоинженерия животных.

Слайд 41Трансгенные животные созданы для производства продуктов медицинского значения. Цепным инструментом для

генетических исследований стали трансгенные мыши. Они дают важную информацию при планировании генной терапии у человека. Ученые, изучающие мышечную дистрофию Дюшена, выделили ген и его продукт – нормальный белок дистрофин, что отсутствует у больных. Предложено способ обеспечения больных детей дистрофином.

Слайд 42Трансгенные мыши оказались крайне необходимыми при изучении моногенных болезней, злокачественных опухолей

и даже мультифакториальных болезней человека. Однако трансгенная технология является неточной, так что введение ДНК не направлено в определенный ло- кус хромосомы. Ген, который переносится, может нарушить функцию другого гена или попасть под контроль других генов.

Слайд 43Светящиеся в темноте коты
В 2007 году южнокорейский ученый изменил ДНК кота,

чтобы заставить его светиться в темноте. И вот, как он это сделал:
исследователь взял кож-
ные клетки мужских особей
турецкой ангоры и, исполь-
зуя вирус, ввел генетичес-
кие инструкции по произ-
водству красного флуорес-
центного белка. Затем он
поместил генетически изме-
ненные ядра в яйцеклетки
и эмбрионы были импланти-
рованы назад донорским котам.

Слайд 44Эко-свинья
Эко-свинья - это свинья, которая была генетически изменена для лучшего переваривания

и переработки фосфора. Свиной навоз богат формой фосфора фитатом, а потому, когда
фермеры используют его
как удобрение, это химичес-
кое вещество попадает в
водосборы и становится при-
чиной цветения водорослей,
которые, в свою очередь,
уничтожают кислород в воде и убивают водную жизнь.
Ученые добавили бактерию E. Coli и ДНК мыши в эмбрион свиньи. Это изменение уменьшило производство фосфора свиньей ни много, ни мало на 70%, что сделало ее более экологически чистой.

Слайд 45Борющиеся с загрязнениями растения
Ученые Вашингтонского университета работают над созданием тополей, которые

могут очищать загрязнен-ные места при помощи впитывания через корневую систему загрязняющих веществ,
содержащихся в подземных водах.
После этого растения разлагают
загрязнители на безвредные
побочные продукты, которые впи-
тываются корнями, стволом и
листьями или высвобождаются
в воздух.
В лабораторных испытаниях трансгенные растения удаляют ни много, ни мало 91% трихлорэтилена из жидкого раствора, химического вещества, являющегося самым распространенным загрязнителем подземных вод.

Слайд 46Ядовитая капуста
Ученые недавно выделили ген, отвечающий за яд в хвосте скорпиона,

и начали искать способы введения его в капусту. Зачем нужна ядовитая капуста? Чтобы уменьшить использование пестицидов и при этом не давать гусеницам портить урожай. Это генетически модифицированное расте-ние будет производить яд, убивающий гусениц после укуса листьев, но токсин изменен так, чтобы быть безвредным для людей.

Слайд 47Плетущие паутину козы
Крепкий и гибкий паутиний шелк является одним из самых

ценных материалов в природе, его можно было бы использовать для производства целого ряда изделий от искусственных волокон до парашютных строп, если бы была возможность производства в коммерческих объемах. В 2000 году компания «Nexia Biotechnologies» заявила, что имеет решение: коза, производящая в своем молоке паутинный белок паука. Иссле-
дователи вложили ген каркас-
ной нити паутины в ДНК козы
таким образом, чтобы живот-
ное стало производить паутин-
ный белок только в своем молоке.

Слайд 48Быстрорастущий лосось
Генетически модифицированный лосось компании «AquaBounty» растет в два раза быстрее,

чем обычная рыба этого вида. На фото показаны два лосося одного возраста. В компании говорят, что рыба имеет тот же вкус, строение ткани, цвет и запах, как и обычный лосось; однако все еще идут споры о ее съедобности.
Генетически созданный лосось
имеет дополнительный гормон
роста от чавычи, который поз-
воляет рыбе производить гор-
мон роста круглый год. Ученым
удалось сохранить активность
гормона при помощи гена, взя-
того у схожей на угря рыбы под названием «американская
бельдюга» и действующего как «включатель» для гормона.

Слайд 49Помидор Flavr Savr
Помидор Flavr Savr был первым коммерчески выращи-ваемым и генетически

созданным продуктом питания, которому предоставили лицензию для потребления человеком. Добавляя антисмысловый ген,компания «Calgene» надеялась замед-
лить процесс созревания поми-
дора, чтобы предотвратить про-
цесс размягчения и гниения,
давая при этом ему возможность
сохранить природный вкус и цвет. В итоге помидоры оказались слишком чувствительными к перевозке и совершенно безвкусными.

Слайд 50Банановые вакцины
Вскоре люди смогут получать вакцину от гепатита Б и холеры,

просто укусив банан. Исследователи успешно создали бананы, картофель, салат-латук, морковь и табак для производства вакцин, но, по их словам, идеальными для этой цели оказались именно бананы.
Когда измененная форма вируса
вводится в молодое банановое
дерево, его генетический мате-
риал быстро становится посто-
янной частью клеток растения.
С ростом дерева его клетки производят вирусные белки, но не инфекционную часть вируса. Когда люди съедают кусок генетически созданного банана, заполненного вирусными белками, их иммунная система создает антитела для борьбы с болезнью; то же происходит и с обычной вакциной.

Слайд 51Менее страдающие от метеоризма коровы
Коровы производят значительные объемы метана в результате

процессов пищеварения. Он производится бактерией, являющейся побочным продуктом богатой целлюлозой диеты, включающей траву и сено. Метан – второй по объему после двуокиси углерода загрязни-тель, вызывающий парниковый эффект, и потому уче-ные работали над созданием коровы, производящей меньше этого газа.
Исследователи в сфере
сельского хозяйства об-
наружили бактерию, от-
вечающую за производст-
во метана, и создали ли-
нию скота, выделяющего
на 25% меньше газа,
чем обычная корова.

Слайд 52Генетически модифицированные деревья
Деревья изменяются генетически для более быстрого роста, лучшей древесины

и даже для обнаружения биологических атак. Сторонники генетически созданных деревьев говорят, что биотехнологии могут помочь остановить обезлесение и удовлетворить потребности в древесине и бумаге. Например,
австралийское эвкалиптовое
дерево изменено для устой-
чивости к низким температу-
рам, была создана ладанная
сосна с меньшим содержани-
ем лигнина – вещества, даю-
щего деревьям твердость. В 2003 году Пентагон даже наградил создателей сосны, меняющей цвет во время биологической или химической атаки.

Слайд 53Лекарственные яйца
Британские ученые создали породу генетически модифицированных кур, которые производят в

яйцах лекарства против рака. Животным добавили в ДНК гены людей, и, таким образом, человеческие белки секретируются в белок яиц вместе со сложными лекарственными белками, схожими с препаратами, используемыми для лечения рака кожи и других заболеваний.
Куры несут яйца с miR24 –
молекулой, способной лечить
злокачественные опухоли и
артрит, а также с человечес-
ким интерфероном b-1a –
антивирусным лекарством,
схожим на современные препа-
раты от множественного склероза.

Слайд 54Активно связывающие углерод растения
Ежегодно люди добавляют около девяти гигатонн углеро-да в

атмосферу, а растения впитывают около пяти из этого количества. Оставшийся углерод способствует пар-никовому эффекту и глобальному потеплению, но ученые работают над созданием генетически модифицированных растений для улавливания этих остатков углерода.
Углерод может в течение
десятилетий оставаться в
листьях, ветвях, семенах
и цветах растений, а тот,
что попадает в корни, мо-
жет быть там столетия. Та-
ким образом, исследователи
надеются создать биоэнер-
гетические культуры с обширной корневой системой, которые смогут связывать и сохранять углерод под землей.

Слайд 55 Клонирование
- это метод размножения

организмов без оплодотворения - посредством размножения одной соматической клетки.

Слайд 56Как осуществляется клонирование
Из яйцеклетки удаляют ядро





Слайд 57Клонирование
Из соматической клетки того организма, который будут клонировать выделяют ядро



ДНК


Слайд 58Клонирование
В яйцеклетку вводят
полученное ядро, содержащее ДНК клонируемого организма.


Слайд 59Клонирование
Яйцеклетка начинает делиться


Слайд 60Клонирование
Ядро активируют.
Через неделю образуется зародыш
из приблизительно 100 клеток


Слайд 61Клонирование
Сурогатное


клонирование –
помещение зародыша
в матку другого организма


Терапевтическое клонирование – помещение зародыша в лабораторную
питательную среду


Слайд 62 В 1997 году впервые было получено сообщение, что удалось, используя

соматические клетки взрослых животных, получить клон (копию) - овцу по кличке Долли. С тех пор работы по клонированию стали производиться быстрыми темпами, и один за другим стали появляться клоны кроликов, коз, телят.

Слайд 63Сама по себе технология клонирования весьма перспективна. Она может быть использована

для быстрого разведения ценных пород животных, для сохранения редких видов, для получения генетических копий уникальных животных. Однако, спешить не стоит. Многие ученые пришли к выводу, что клонированные животные живут куда меньше и
очень часто хворают.

Слайд 64
Первое клонированное животное - овечка Долли. К 6 году своей жизни

она пережила артрит и резкое ослабление иммунной системы. После проведенных исследований генетики вынесли неутешительный вердикт: это старость, и лечение бессмысленно. В 2002 году после прогрессирующего заболевания легких овцу Долли пришлось усыпить.


Слайд 65Но все же перспектив у клонирования много. И возможно пройдет не так

много времени, как будут клонированы мамонты, туры, морские коровы, которые вымерли много лет тому назад

Слайд 66Задачи, стоящие перед клонированием:
Клонирование органов и тканей
Возможность бездетным людям иметь детей
Помощь

людям, страдающим тяжкими генетическими заболеваниями
Клонирование человеческих генов, терапевтических белков для лечения больных в сельскохозяйственных животных

Слайд 67Терапевтическое клонирование


Слайд 68 Человеческий клон


На самом деле клон

-- это просто идентичный близнец другого человека, отсроченный во времени. Клоны человека будут обычными человеческими существами, совершенно как вы или я, вовсе не зомби. Их будет вынашивать обычная женщина в течение 9 месяцев, они родятся и будут воспитываться в семье, как и любой другой ребенок. Им потребуется 18 лет, чтобы достичь совершеннолетия, как и всем остальным людям. Следовательно, клон-близнец будет на несколько десятилетий младше своего оригинала, поэтому нет опасности, что люди будут путать клона-близнеца с оригиналом. Также как и идентичные близнецы, клон и донор ДНК будут иметь различные отпечатки пальцев. Клон не унаследует ничего из воспоминаний оригинального индивида. Благодаря всем этим различиям, клон - это не ксерокопия или двойник человека, а просто младший идентичный близнец.

Слайд 69 Репродуктивное клонирование
Донор
Реципиент
Появление потомства



Слайд 70 В каких сферах находят сегодня применение в нашей стране методы генетики?



В криминалистике - анализы на соответствие ДНК подозреваемого образцам преступника.
В судебной практике - тесты на подтверждение родства.
В здравоохранении - создание методов диагностики генных заболеваний. Своевременная диагностика в случае таких недугов может многое изменить. Существуют центры пренатальной (предродовой) цитогенетической диагностики, где можно до рождения ребенка исследовать его геном на предмет отклонений


Слайд 71
Благодарю за внимание!


Обратная связь

Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое ThePresentation.ru?

Это сайт презентаций, докладов, проектов, шаблонов в формате PowerPoint. Мы помогаем школьникам, студентам, учителям, преподавателям хранить и обмениваться учебными материалами с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика