Эксайтотоксичность (от англ. exite – возбуждать) - патологический токсический процесс, развивающийся при гипервозбуждении рецепторов глутамата.
Глутаматэргическая теория нейродегенеративного процесса: «Универсальный механизм развития всех нейродегенеративных заболеваний - эксайтотоксичность в результате избыточной активации постсинаптических глутаматных рецепторов NMDA-типа».
Нейродегенеративные болезни поражают десятки миллионов людей в мире и приносит ущерб в сотни миллиардов долларов. (Fillit, Hill, 2005).
Разработки и изучение эндогенной защиты мозга от нейродегенеративного повреждения - возможность направленной регуляции состояния клеток модулирующими веществами.
Данная работа посвящена одному из претендентов этой группы - уабаину.
Изучение механизмов действия уабаина в широком диапазоне концентраций в нормальных условиях и эксайтотоксическом стрессе, вызванном агонистами ионотропных рецепторов глутамата в первичной культуре нейронов коры крыс.
Исследовать влияние уабаина в субнаномолярных концентрациях (от 0,01 нМ до 1 нМ) в условиях цитотоксического действия NMDA и КА на нейроны коры крыс для оценки его нейропротекторного потенциала;
2. Исследовать механизм собственного цитотоксического действия уабаина на нейроны коры в широком диапазоне концентраций (от 0,1 нМ до 0,1 мМ);
3. Оценить возможное тоническое действие эндогенного глутамата в нормальных условиях на электрогенез нейронов;
4. Исследовать действие субнаномолярных концентраций уабаина на интегральные токи, вызываемые NMDA и КА, и спонтанную синаптическую активность нейронной сети;
5. Исследовать роль внутриклеточного Са2+ сигнала в запуске эксайтотоксичности и при реализации эффектов субнаномолярных концентрации уабаина;
Цель
задачи исследования
Интактная культура нейронов. Скопления нейронов и мощные тяжи отростков между ганглиями. Съёмка изображения с применением фазового контраста.
Установка для пэтч-кламп
1. Уабаин в условиях эксайтотоксического стресса оказывает нейропротекторное воздействие, повышая выживаемсть кортикальных нейронов путём купирования развития апоптоза в результате стабилизации клеточного метаболизма, отражением чего является повышение экспрессии антиапоптотического белка Bcl-2. Нейропротекторное действие уабаина сохраняется в интервале двух порядков субнаномолярых концентраций от 0,01 нМ до 1 нМ.
2. В субнаномолярных концентрациях уабаин не оказывает на кортикальные нейроны токсического влияния - соотношение живых, некротических и апоптотических клеток соответствует интактной культуре. Собственный цитотокчический эффект уабаина развивается, начиная с концентрации 10 нМ, определяется, очевидно, ингибированием ферментативной активности Na+/K+-АТФазы и развивается по пути некроза. Нейропротенторное действие уабаина не связано с транспортной функцией этого фермента.
3. В культуре нейронов коры головного мозга в покое происходит неквантовое тоническое высвобождение глутамата, который в условиях нарушения функционирования глутаматных транспортеров может обеспечивать выброс нейромедиатора, достаточный для запуска нейродегенеративных процессов.
4. Действие NMDA и КА сопровождается генерацией входящих деполяризующих токов и значительным повышением частоты сВПСТ. Увеличение частоты спонтанных синаптических токов полностью нивелируется уабаином в концентрации 1 нМ и определяется увеличением концентрацией свободного кальция в пресинаптических терминалях. Загрузка нейронов хелатором Са2+ ВАРТА, аналогично 1 нМ уабаина, вызывает уменьшение частоты сВПСТ при действии NMDA.
5. При длительной аппликации насыщяющих концентраций NMDA уровень [Са2+]i вырастает и характеризуется двумя волнами внутриклеточной кальциевой дерегуляции, первичной – в связи с открытием каналов рецепторов и вторичной – в связи с нарушением целостности митоходриальных депо. Уабаин в наномолярных концентрациях существенно ослабляет рост [Са2+]i , приводя её к контрольным значениям.
Если не удалось найти и скачать презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:
Email: Нажмите что бы посмотреть