- Главная
- Разное
- Дизайн
- Бизнес и предпринимательство
- Аналитика
- Образование
- Развлечения
- Красота и здоровье
- Финансы
- Государство
- Путешествия
- Спорт
- Недвижимость
- Армия
- Графика
- Культурология
- Еда и кулинария
- Лингвистика
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Маркетинг
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Культуры эукариотических клеток презентация
Содержание
- 1. Культуры эукариотических клеток
- 2. Лекции – 8 часов Практические занятия – 4 часа Зачет
- 3. In vitro – культивирование объектов «в стекле»
- 4. «В (на) живом» — внутри организма
- 5. Клеточные технологии включают: культивирование растительных
- 6. Главное требование – соблюдение строгой асептики
- 7. Ламинар-боксы
- 8. Второе условие – использование специальных питательных
- 9. Способы культивирования растительных клеток Поверхностное культивирование на
- 10. Каллус (от лат. callus — толстая кожа, мозоль)
- 11. Каллус - недифференцированные растительные клетки, выращиваемые поверхностным способом на полутвердой питательной среде
- 12. Каллус может образоваться не только в искусственных
- 13. 1. Выбор экспланта Эксплант - фрагмент ткани или органа, используемый для получения первичного каллуса
- 14. Каллусы однодольных растений обычно получают из зародышей,
- 15. Лучшими эксплантами для получения каллуса являются:
- 16. Проращивание простерилизованных семян в асептических условиях дает наиболее пригодный материал для получения каллусов
- 17. 2. Стерилизация растительного материала На поверхности органов
- 18. АНТИСЕПТИКИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЕЙ:
- 19. ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО МАТЕРИАЛА:
- 20. 3. Перенос стерильных эксплантов на питательную среду
- 21. 4. Получение первичного каллуса Образование каллуса, в первую очередь, отмечается на раневой поверхности экспланта
- 22. При оптимально подобранной среде первичные каллусы в
- 23. 5. Субкультивирование (пассирование) Первичный каллус разделяют на
- 24. Каллусные культуры различаются по: интенсивности роста; окраске; консистенции и др. Типы каллусных культур:
- 25. Типы каллусных культур: рыхлые
- 26. Направления использования каллусных культур: изучение процессов
- 27. Суспензионная культура – отдельные клетки или клеточные
- 28. Необходимое условие для поддержания суспензионных культур – постоянное перемешивание питательной среды
- 29. удобная модель для молекулярно-биологических и биохимических
- 30. 1. Отбор хорошо растущей каллусной культуры рыхлого
- 31. Суспензионные культуры состоят из: отдельных клеток;
- 32. А В С С
- 33. слабоагрегированные; (состоят из одиночных клеток
- 34. КУЛЬТУРЫ ПРОТОПЛАСТОВ
- 35. Протопласт – это живое содержимое растительной клетки, лишенное клеточной стенки
- 36. ИСТОЧНИКИ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТОПЛАСТОВ: изолированные органы растений и
- 37. Основан на механическом разрезании клеточной стенки у
- 38. МЕХАНИЧЕСКИЙ МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТОПЛАСТОВ
- 39. Плазмолиз – явление отделения протопласта растительной клетки от клеточной стенки в гипертонической среде
- 40. Схема строения растительной клеточной стенки
- 41. На практике часто используются ферментные препараты, включающие
- 42. Основные компоненты питательных сред для культивирования растительных
- 43. РЕГУЛЯТОРЫ РОСТА РАСТЕНИЙ Содержание регуляторов роста является
- 44. АУКСИНЫ β-индолил-3-уксусная кислота
- 45. АУКСИНЫ НЕОБХОДИМЫ ДЛЯ: стимуляции деления и
- 46. Стимуляция закладки корней (ризогенеза) у черенков под действием ауксинов
- 47. ИУК способна легко окисляться клетками растений.
- 48. ЦИТОКИНИНЫ Зеатин Изопентениладенин
- 49. Зеатин термолабилен, поэтому его нельзя автоклавировать
- 50. ЦИТОКИНИНЫ ВКЛЮЧАЮТ В СОСТАВ СРЕД ДЛЯ:
- 51. ФИЗИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ: условия освещения; Каллусные
- 52. Ростовой цикл каллусных и суспензионных культур
- 53. 1- лаг-фаза; 2 - экспоненциальная; 3 -
Лекции – 8 часов Практические занятия – 4 часа Зачет
Слайд 1Культуры эукариотических клеток
Дитченко Татьяна Ивановна
Кафедра клеточной биологии и биоинженерии растений
Слайд 3In vitro – культивирование объектов «в стекле» (пробирке, колбе, биореакторе) на
искусственных питательных средах в стерильных условиях
Культуры клеток – это клетки, растущие или сохраняющие жизнеспособность вне организма (в условиях in vitro)
Слайд 5Клеточные технологии включают:
культивирование растительных клеток;
культивирование животных клеток
Цель курса
«Культуры эукариотических клеток» – знакомство с методами получения культур клеток, их ведения, а также практическим использованием этих объектов
Слайд 6Главное требование –
соблюдение строгой асептики
Все работы по получению культур растительных
и животных клеток, их пересадкам производятся в ламинар-боксах
Слайд 8Второе условие –
использование специальных питательных сред
Культуральная среда должна обеспечивать
все внешние условия, которые клетки имели
in vivo
Слайд 9Способы культивирования растительных клеток
Поверхностное культивирование на плотной (агаризованной) питательной среде
Глубинное культивирование
в жидкой питательной среде
Каллусные культуры
Суспензионные культуры
Слайд 11Каллус - недифференцированные растительные клетки, выращиваемые поверхностным способом на полутвердой питательной
среде
Слайд 12Каллус может образоваться не только в искусственных условиях, но и в
природе, например, на раневой поверхности. Каллусная ткань способствует зарастанию ран, срастанию прививок и служит для восстановления (регенерации) утраченных органов
Слайд 131. Выбор экспланта
Эксплант - фрагмент ткани или органа, используемый для получения
первичного каллуса
Слайд 14Каллусы однодольных растений обычно получают из зародышей, корней,
отрезков основания стебля
Каллусы
двудольных растений могут быть получены практически из любых органов
(отрезков стеблей и корней, мезофилла листа, органов цветка)
Слайд 15Лучшими эксплантами для получения каллуса являются:
молодая ткань;
ткань ответственная за пролиферацию
(меристема)
Нежелательно использовать:
одревесневшие ткани;
старые ткани с низким уровнем метаболизма;
плохо пролиферирующие ткани (напр., мякоть плодов);
ткани, покрытые восками, суберином и т.п.
Слайд 16Проращивание простерилизованных семян в асептических условиях дает наиболее пригодный материал для
получения каллусов
Слайд 172. Стерилизация растительного материала
На поверхности органов растений всегда находится эпифитная микрофлора.
Эксплант должен быть освобожден от всех видов микроорганизмов (бактерий, грибов, микоплазм и т.д.).
Поверхностная стерилизация освобождает эксплант от наружной инфекции.
Слайд 18АНТИСЕПТИКИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЕЙ:
соединения, содержащие активный хлор, –
0,5-1% (гипохлорит кальция, гипохлорит натрия, хлорная известь, хлорамин);
двухлористая ртуть (сулема), 0,1-1 %-ный раствор;
формалин, 5%-ный раствор;
перекись водорода, 10-20%-ный раствор;
этиловый спирт, 70%-ный раствор;
фенол, 5%-ный раствор;
антибиотики (в случае внутренней инфекции)
двухлористая ртуть (сулема), 0,1-1 %-ный раствор;
формалин, 5%-ный раствор;
перекись водорода, 10-20%-ный раствор;
этиловый спирт, 70%-ный раствор;
фенол, 5%-ный раствор;
антибиотики (в случае внутренней инфекции)
Слайд 19ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО МАТЕРИАЛА:
Предварительная стерилизация
(проводят очистку поверхности путем
ее промывания проточной водой; обработки этанолом (70%-ный раствор в течение 1 мин), растворами CuSO4 либо KMnO4)
2) Стерилизация
(в условиях ламинар-бокса предварительно простерилизованные ткани помещают в стерилизующий раствор)
3) Постстерилизация
(растительный материал отмывают от стерилизующего агента 3-4 порциями стерильной дистиллированной воды)
2) Стерилизация
(в условиях ламинар-бокса предварительно простерилизованные ткани помещают в стерилизующий раствор)
3) Постстерилизация
(растительный материал отмывают от стерилизующего агента 3-4 порциями стерильной дистиллированной воды)
Слайд 214. Получение первичного каллуса
Образование каллуса, в первую очередь, отмечается на раневой
поверхности экспланта
Слайд 22При оптимально подобранной среде первичные каллусы в количестве достаточном для пересадки
образуются в течение 3-8 недель в зависимости от вида растения
Слайд 235. Субкультивирование (пассирование)
Первичный каллус разделяют на части, которые в дальнейшем культивируются
отдельно.
Следует обратить внимание на размеры трансплантов, переносимых на свежую питательную среду: если они слишком малы, то дальнейший рост каллуса может быть угнетен.
Слайд 24Каллусные культуры различаются по:
интенсивности роста;
окраске;
консистенции и др.
Типы каллусных культур:
Слайд 25Типы каллусных культур:
рыхлые
(легко распадаются на отдельные клетки);
среднеплотные
(клетки могут
быть отделены друг от друга сильным встряхиванием);
плотные
(клетки очень мелкие, не отделяются взбалтыванием)
плотные
(клетки очень мелкие, не отделяются взбалтыванием)
Слайд 26Направления использования каллусных культур:
изучение процессов цитодифференцировки и морфогенеза;
биохимические и молекулярно-биологические исследования;
изучение
механизмов опухолеобразования;
получение суспензионных культур;
регенерация растений, получение новых форм растений;
сохранение в растущем состоянии коллекций разных видов растений
получение суспензионных культур;
регенерация растений, получение новых форм растений;
сохранение в растущем состоянии коллекций разных видов растений
Слайд 27Суспензионная культура – отдельные клетки или клеточные агрегаты, выращиваемые в жидкой
питательной среде во взвешенном состоянии
Слайд 28Необходимое условие для поддержания суспензионных культур –
постоянное перемешивание питательной среды
Слайд 29 удобная модель для молекулярно-биологических и биохимических исследований;
(клетки в одинаковой степени
доступны для внешнего воздействия, более «открыты»);
возможность быстрого набора биомассы для получения БАВ;
простота процессов субкультивирования
(легко заменить или отобрать питательную среду)
возможность быстрого набора биомассы для получения БАВ;
простота процессов субкультивирования
(легко заменить или отобрать питательную среду)
ОСНОВНЫЕ ПРЕИМУЩЕСТВА СУСПЕНЗИОННЫХ КУЛЬТУР:
Слайд 301. Отбор хорошо растущей каллусной культуры рыхлого типа
2. Инициализация первичной суспензии
2-3 г свежей массы каллусной ткани на 60-100 мл жидкой питательной среды.
3. Культивирование
Колбы помещают на качалку, скорость вращения которой составляет 100-120 об/мин.
Процесс получения первичной суспензии занимает 2-3 недели.
ЭТАПЫ ПОЛУЧЕНИЯ:
Слайд 31Суспензионные культуры состоят из:
отдельных клеток;
клеточных групп (2-10 клеток);
многоклеточных агрегатов
(сотни и тысячи клеток).
Слайд 33 слабоагрегированные;
(состоят из одиночных клеток (40%) и мелких агрегатов (60%),
агрегаты не должны содержать более 10-12 клеток)
среднеагрегированные;
(состоят из одиночных клеток (40%), мелких агрегатов (40%) и крупных агрегатов (20%))
высокоагрегированные;
(состоят из мелких (40%) и крупных агрегатов (60%)
среднеагрегированные;
(состоят из одиночных клеток (40%), мелких агрегатов (40%) и крупных агрегатов (20%))
высокоагрегированные;
(состоят из мелких (40%) и крупных агрегатов (60%)
ТИПЫ СУСПЕНЗИОННЫХ КУЛЬТУР:
(в зависимости от степени агрегированности)
Слайд 36ИСТОЧНИКИ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТОПЛАСТОВ:
изолированные органы растений и их части (листья, корни, лепестки);
суспензионная
культура;
каллусная ткань.
каллусная ткань.
Слайд 37Основан на механическом разрезании клеточной стенки у клеток в плазмолизированном состоянии
Основан
на разрушении клеточной стенки с помощью ферментов
Клеркер (1892)
Кокинг (1960)
Слайд 39Плазмолиз – явление отделения протопласта растительной клетки от клеточной стенки в
гипертонической среде
Слайд 41На практике часто используются ферментные препараты, включающие комплекс из нескольких гидролитических
ферментов
Состав ферментативной смеси должен наиболее полно соответствовать составу клеточной стенки!
Слайд 42Основные компоненты питательных сред для культивирования растительных клеток:
макроэлементы;
микроэлементы;
источник углерода;
витамины;
регуляторы роста
Слайд 43РЕГУЛЯТОРЫ РОСТА РАСТЕНИЙ
Содержание регуляторов роста является определяющим фактором для успешного роста
культур клеток растений
АУКСИНЫ
ЦИТОКИНИНЫ
Слайд 44АУКСИНЫ
β-индолил-3-уксусная кислота (ИУК)
β-индолил-3-масляная кислота
(ИМК)
α-нафтилуксусная кислота (НУК)
2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д)
α-нафтилуксусная кислота (НУК)
2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д)
Слайд 45АУКСИНЫ НЕОБХОДИМЫ ДЛЯ:
стимуляции деления и растяжения клеток каллусных и суспензионных культур;
стимуляции
образования корней (ризогенеза);
в сочетании с другими фитогормонами для формирования у протопластов клеточных стенок
в сочетании с другими фитогормонами для формирования у протопластов клеточных стенок
Слайд 47ИУК способна легко окисляться клетками растений.
Ее редко добавляют в среду
для культивирования в качестве единственного ауксина
Синтетические ауксины (2,4-Д, НУК) обладают более высокой биологической активностью по сравнению с природными (ИУК, ИМК)
Например, ИУК в 300 раз менее активна, чем 2,4-Д и в 30 раз менее активна, чем НУК
Слайд 48ЦИТОКИНИНЫ
Зеатин
Изопентениладенин
(ИПА)
6-фурфуриладенин (кинетин)
6-бензиламинопурин (6-БАП)
6-фурфуриладенин (кинетин)
6-бензиламинопурин (6-БАП)
Слайд 50ЦИТОКИНИНЫ ВКЛЮЧАЮТ В СОСТАВ СРЕД ДЛЯ:
стимуляции клеточных делений в каллусных и
суспензионных культурах, в культурах протопластов;
образования побегов (стеблевой морфогенез)
образования побегов (стеблевой морфогенез)
Слайд 51ФИЗИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ:
условия освещения;
Каллусные культуры и клеточные суспензии выращиваются либо темноте,
либо под лампами белого света.
температура;
Для большинства культур поддерживается в термостатах на уровне 26±1°С.
условия аэрации;
Важны для суспензионных культур. Зависят от эффективности перемешивания питательной среды и подачи стерильного воздуха (в случае культивирования в биореакторах).
влажность воздуха
В культуральной комнате должна составлять 60–70 %
температура;
Для большинства культур поддерживается в термостатах на уровне 26±1°С.
условия аэрации;
Важны для суспензионных культур. Зависят от эффективности перемешивания питательной среды и подачи стерильного воздуха (в случае культивирования в биореакторах).
влажность воздуха
В культуральной комнате должна составлять 60–70 %
Слайд 531- лаг-фаза; 2 - экспоненциальная; 3 - линейная; 4 - фаза
замедленного роста; 5 - стационарная фаза; 6 - фаза деградации клеток
Ростовой цикл, или цикл выращивания, – это период от помещения транспланта/инокулюма на свежую питательную среду до следующей пересадки.
