Изучение гидролиза крахмала презентация

шаг 2, шаг 3шаг 1, шаг 2, шаг 3, шаг 4)
Результаты измерений
Расчеты
Итоговый график
Выводы
Список литературы

Главный слайд

которого состоит из остатков глюкозы. Он синтезируется растениями и откладывается в них в качестве запасного питательного вещества.

Химическая формула крахмала: (C6H10O5)n

Содержание

в результате специальной обработки с целью получения заданных свойств.

Модификация позволяет получать жидкокипящие, набухающие и экструзионные крахмалы.

 α-амилаза – это фермент поджелудочной железы, который гидролизует крахмал в желудочно-кишечном тракте. При разложении крахмала образуются более простые углеводы – мальтоза и глюкоза.

Крахмалу свойственно набухание – это способность медленно и в определенной мере впитывать холодную воду, не растворяясь в ней.

Содержание

и субстрата

расчет конечной концентрации глюкозы в зависимости от времени гидролиза крахмала

Цели и задачи

Содержание

соотношение подбиралось таким образом, чтобы при скпетрофотометрическом определении данные попадали в пределы от 0,2 до 0,6-0,8. В этих пределах значения прибора (спектрофотометра) содержат наименьшую вероятность ошибки.
Крахмал: модифицированный, хладонабухающий «Прежефло» Е1422 (от «Милорадо») из восковой кукурузы. Точная навеска в эксперименте:
m крахмала = 4,000г на 100мл дистиллированной воды. С крахмала = 40мг/мл. Раствор крахмала готовится при непрерывном помешивании с помощью магнитной мешалки. Магнитную мешалку помещаем в стакан со 100 мл дистиллированной воды и медленно, маленькими порциями, равномерно добавляем в него крахмал.
Фермент: α-Amylase from hog pancreas, Mr 50000, активность 57U.
Точная навеска в эксперименте: m фермента = 0,501г на 4,998 мл воды. С фермента = 100мг/мл. После разведения фермент фильтруется.

Содержание

содержащие буферную смесь, предназначенную для приготовления рабочего раствора, в состав которого входят: трис-бициновый буфер 0,1М, n-фенолсульфонат 20мМ, 4-аминоантипирин 1,2 мМ. Каждый флакон рассчитан на приготовление 50 мл буферного раствора.
Реагент 2. 4 флакона, содержащие смесь лиофилизированных ферментов: глюкозооксидазы, активность в конечном растворе 20000 Е/л, и пероксидазы, активность в конечном растворе 10000 Е/л. Каждый флакон рассчитан на приготовление 50 мл основного реагента. Реагент 1 перенести в мерную колбу емкостью 50 мл и довести до 50 мл дистиллированной водой. Затем Реагент 2 растворить в 50 мл раствора Реагента 1. Раствор должен быть прозрачным.
Виала - сосуд объемом 20 мл, используемый в эксперименте.
Глюкоза-моногидрат: Mr = 198,17, чистота 99,5%;
Точная навеска в эксперименте: m глюкозы-моногидрата = 40,5 мг доводим водой до 40,5мл. С глюкозы = (40,5мг/40,5мл)*(180/198) = 0,9091мг/мл – концентрация чистой глюкозы.

Содержание

особенностей гидролиза крахмала в присутствии фермента (панкреатическая панкреатическая αпанкреатическая α-амилаза). В эксперименте использовался модифицированный хладонабухающий крахмал с концентрацией С = 40 мг/мл.
Расчет концентраций разведений матричного р-ра фермента
(0,5 мг на 5 мл воды, С = 100 мг/мл.):



 

Содержание

взять
24 виалы с 5 мл раствора реагента в каждой.

Возьмём 4 пробы
фермента различных концентраций, в каждой ставим по 3 параллели

Для гидролиза
к 5 мл крахмала добавим 0,35 мл фермента.

Измерения оптической плотности проведем
в 2 точках: 20 и 40 минут – время инкубации смеси крахмал/фермент.

Содержание

опытной пробы относительно калибровочной. Расчет в каждой серии проводится по формуле:
 Еоп/ Екп*С(глюкозы в растворе) = содержание глюкозы в образце (ммоль/л), где:
Еоп – поглощение опытной пробы,
Екп – поглощение калибровочной пробы.
Приготовление калибровочного раствора:
Взвешиваем в колбе или стаканчике 0,05 г моногидрат глюкозы, доводим дистиллированной водой до 50 мл.

В эксперименте была поставлена промежуточная задача – оценить
влияние беспрерывного помешивания инкубируемой смеси на степень
гидролиза крахмала.
Ставим ещё одну параллель с концентрацией фермента 100 мг/мл (без перемешивания во время инкубации), для нее также берем точки 20 и 40 минут.
 

Содержание

в каждую) и добавляем в них по 0,35 мл фермента с различными концентрациями (40,60,80 и 100мг/мл). Все сосуды перемешиваем в одном ритме на протяжении всего инкубационного периода, а одну виалу (с концентрацией 100мг/мл) - только в момент добавления фермента.

Предварительно разлив во все виалы по 5 мл рабочего реагента, на 20-ой минуте после начала инкубации добавляем по 50 мкл смеси крахмал/фермент в раствор реагента и отставляем для развития окраски на 1 час.

То же самое повторяем
на 40-ой минуте.

Содержание

поглощение/оптическая плотность опытной и калибровочной проб

Содержание

ср. = (D1 + D2 + D3)/3

С об. = D оп. /D калибр. *С глюкозы

Содержание

одной и той же концентрации фермента видно, что на малых временных отрезках они отличаются незначительно.

При измерении оптической плотности инкубационной смеси, добавленной на 20-ой минуте, даже спустя час значительного изменения окраски растворов не происходит. Поэтому время инкубации может быть определено не столь строго, так как это мало влияет на величину оптической плотности.

С увеличением концентрации фермента растет оптическая плотность растворов опытных образцов и, соответственно, количество глюкозы в полученных образцах.

Содержание

практике, которая проводилась на базе НИИ Питания РАМН в лаборатории «Обмена веществ и энергии» под руководством к.м.н, старшего научного сотрудника Соколова А.И.

Презентация выполнена
студенткой 4-го курса
отделения биохимии МБФ (группа 482)
Федосеевой Евгенией Сергеевной.
e-mail: dorigen@mail.ru

В ходе работы был проведен ряд экспериментов, раскрывающих особенности гидролиза крахмала.
Моя презентация посвящена проблеме влияния различных концентраций фермента на субстрат и нахождения оптимального соотношение фермента и субстрата.

Содержание

3-е изд., перераб. и доп. М.: Изд-во “Элевар” 2000. 512с. ил.

А.Ленинджер, Биохимия. М.: Изд-во “Мир” 1976. 272с.

Экстракционная хроматография, под ред. Т. Браун и др., пер. с англ., М., 1978; Snyder L. R., Кirkland J.J.,

Nоvotny M., Ishii D., Microcolumn separations columns, instrumentation and ancillary techniques, Amst., 1985 (v.30).

Содержание